实验十 骨髓铁染色
Bone marrow iron staining
一、实验目的
掌握骨髓铁染色的原理和临床意义，能正确判断骨髓铁染色的结果，知道骨髓铁染色方法和注意事项。
二、实验原理
骨髓小粒中的细胞外铁和有核红细胞中的内铁，在酸性环境下与亚铁氰化钾作用，呈普鲁士蓝阳性反应，生成蓝色的亚铁氰化铁沉淀，定位在含铁的部位。
三、实验器材
新鲜骨髓片、染色缸、显微镜、擦镜纸。
四、实验试剂
1.200g／L亚铁氰化钾溶液：溶液可保存数月。
2.浓盐酸。
3.铁染色应用液：取200g／L亚铁氰化钾溶液约5.0ml，滴加浓盐酸，边加边摇，使其产生白色混浊沉淀，然后再滴加亚铁氰化钾溶液，使混浊消失即可，过滤备用。此液临用前配制。
4.0.5％伊红乙醇溶液。
五、实验方法
1.取骨髓小粒较多的涂片1张，最好用蜡笔在涂片体、尾部画两条线，以防细胞内铁复染时液体渗出。
2.滴加应用液使之盖满涂片，于室温下作用30min（冬天可适当延长），水洗，待干。
3.在蜡笔线中间区加0.5％伊红乙醇溶液复染2min。
4.水洗，待干，用油镜镜检。在骨髓小粒内观察细胞外铁，在伊红复染区镜检幼红细胞内铁。
5.结果判断：
（1）细胞外铁（见彩图2‐2）：常用低倍镜观察。阳性程度判断标准如下：
－：骨髓小粒呈淡黄色，无蓝色成分。
＋：骨髓小粒网架中分布较淡的蓝色成分。
＋＋：有较多蓝色铁粒和深蓝色的圆形小珠。
＋＋＋：有许多铁粒、小珠和少数蓝色小块。肉眼可观察到小粒变为蓝色。
＋＋＋＋：大量的铁粒、小珠和许多蓝色小块。肉眼可观察到小粒明显变蓝色。
（2）细胞内铁：计数100个有核红细胞，镜下记录阳性细胞（胞质中有蓝色颗粒）的百分率。同时注意细胞内铁颗粒数目、大小、染色深浅等变化。特别应注意有无环状铁粒幼红细胞和较大的内铁颗粒。按细胞内铁阳性程度分为四型。Ⅰ型：胞浆内有1～2个铁粒。Ⅱ型：胞浆内有3～5个铁粒。Ⅲ型：胞浆内有6～10个铁粒。Ⅳ型：胞浆内11个铁粒以上。若环核排列的铁粒5个以上或铁粒排列在核周1／3以上的幼红细胞称环形铁粒幼红细胞（见彩图2‐3）。
6.报告细胞外铁阳性程度和细胞内铁阳性细胞百分率。
六、注意事项
1.铁染色用的玻片、杯子、试剂等应避免受铁剂污染。新购的玻片一般不用除铁处理，清洗过的玻片不能放有铁锈的烤箱内烘烤。
2.亚铁氰化钾消除混浊时，因反应较慢，后期滴加速度不宜太快。
3.伊红易结晶析出，故复染时间太长或浓度太高，均会影响细胞内铁的观察。
4.铁染色应用液应临用前配制，保存时间不能超过3h。
5.铁染色作为一种最简便的常规细胞化学染色，有助于各种贫血的诊断和鉴别诊断，当涂片无骨髓小粒，虽无法观察外铁，但内铁的观察对贫血的诊断有时也可起到决定性的作用。
七、结果报告
八、临床意义
1.鉴别缺铁性贫血和非缺铁性贫血 缺铁性贫血细胞外铁阴性，内铁阳性率减低，其铁粒细小，数目1～2个；非缺铁性贫血，细胞外铁和内铁正常或增高。
2.用于诊断铁粒幼细胞性贫血 环形铁粒幼红细胞增多，占总有核红细胞的15％以上。
3.其他贫血的铁染色情况不一 如巨幼细胞性贫血可伴有缺铁，也可正常或幼红细胞铁粒增多；感染性贫血外铁阳性，而内铁颗粒常减少。
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