过碘酸－雪夫反应

实验十一　过碘酸－雪夫反应

Periodic acid Schiff reaction，PAS

一、实验目的

掌握过碘酸－雪夫反应的原理和临床意义，能正确判断过碘酸－雪夫反应的结果，能进行过碘酸－雪夫反应的操作和知道其注意事项。

二、实验原理

过碘酸－雪夫反应又称糖原染色，其原理为细胞内含有乙二醇基的多糖类，被过碘酸氧化产生醛基，此醛基与雪夫氏试剂（Schiff’s液）作用，使无色的品红变成紫红色染料，而沉积于含有多糖类的细胞内。

三、实验器材

新鲜血片或骨髓片、染色缸、显微镜、擦镜纸。

四、实验试剂

1.固定液：95％乙醇。

2.过碘酸作用液：过碘酸1g溶于蒸馏水100ml中，置4℃保存（临用前配制为好）。

3.雪夫氏试剂（Schiff摧s液）：400ml蒸馏水煮沸除去CO₂，逐渐加碱性品红2.0g溶解后，待冷却至60℃，加1mmol／L HCl40ml，再加偏重亚硫酸钠（NaHSO₃）4g，放置24h后加活性炭1.5g，放置0.5d后过滤，置棕色瓶中，于4℃保存。

4.20g／L甲基绿或1％美蓝。

五、实验方法

1.新鲜或陈旧血片、骨髓片用固定液固定10min，水洗。

2.滴加过碘酸，作用10min，水洗。

3.浸入Schiff’s液30min，水洗2min。

4.用20g／L甲基绿或1％美蓝复染20min。

5.水洗，待干，用油镜镜检。

6.结果判断：细胞浆内染成红色为阳性，判断标准随细胞不同而异：

（1）有核红细胞判断：

－：无红色阳性颗粒和浅红色物质。

＋：胞浆中有少数分散红色阳性颗粒，或呈浅红色，比正常红细胞色深。

＋＋：胞浆中有1或2个浓的红色颗粒环，或胞浆中有1～10个中等大颗粒，或弥漫的红色物。

＋＋＋：胞浆中有11～20个红色中粗颗粒或染深红色。

＋＋＋＋：胞浆中红色颗粒明显增多且较粗，致密或呈紫红色物质。

（2）淋巴细胞的判断：

－：胞浆内无粉红色颗粒。

＋：胞浆内有1～10个红色小颗粒或弥漫的浅红色物质。

＋＋：10个以上红色颗粒。

＋＋＋：胞浆中含有较多红色颗粒及小块紫红色物质。

＋＋＋＋：胞浆含有许多红色颗粒及小块紫红色物质。

（3）中性粒细胞的判断：

－：胞浆内无粉红色颗粒。

＋：胞浆中呈浅红色，有极少数红色阳性颗粒。

＋＋：胞浆中呈红色，有少数红色阳性颗粒。

＋＋＋：胞浆中呈深红色，颗粒较紧密但尚有空隙。

＋＋＋＋：胞浆中呈深紫红色，颗粒紧密无空隙。

7.报告阳性率与积分值，其计算方法同中性粒细胞碱性磷酸酶染色。

六、注意事项

1.Schiff’s液变红即不能再用，以免细胞出现假阳性。

2.配制Schiff’s液器具须十分清洁干燥，配好的Schiff’s液应于棕色瓶内暗处保存。

3.已染色的标本不能久置，应在一周内观察结果。

七、结果报告

八、临床意义

1.用于鉴别红细胞系统疾病　红白血病和骨髓增生异常综合征时幼红细胞可呈阳性反应（见彩图2‐4），缺铁性贫血和珠蛋白生成障碍性贫血时幼红细胞也可呈阳性反应，而巨幼红细胞贫血、再生障碍性贫血和溶血性贫血时幼红细胞呈阴性反应。

2.用于鉴别白细胞系统疾病　急性淋巴细胞白血病时原始和幼稚淋巴细胞呈阳性反应，阳性物质呈粗颗粒状或块状，而传染性淋巴细胞增多症、传染性单核细胞增多症时的淋巴细胞呈阴性或弱阳性。急性粒细胞白血病时原始粒细胞呈阴性或弱阳性反应，阳性物质呈细颗粒状或淡红色弥漫状。急性单核细胞白血病时原始和幼稚单核细胞可呈阳性反应，阳性物质呈细颗粒状，有时细胞边缘的阳性颗粒较粗大。

3.用于鉴别其他细胞　戈谢细胞呈强阳性反应，而尼曼‐匹克细胞呈弱阳性或阴性反应；不典型的巨核细胞呈强阳性反应，而霍金奇细胞（R‐S细胞）呈阴性或弱阳性反应；转移性腺癌细胞呈强阳性反应。