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α‐醋酸萘酚酯酶染色

时间:2023-05-12 理论教育 版权反馈
【摘要】:血细胞内的α醋酸萘酚酯酶能将基质液中的α醋酸萘酚水解产生α萘酚,α萘酚再与基质液中的重氮盐偶联,生成灰黑或棕黑色沉淀物,定位于胞质中。基质液现配现用,不能保存,过滤后应尽快试验,以免大量沉淀物析出,影响染色效果。

实验十三 α‐醋酸萘酚酯酶染色

Alpha‐naphthol acetate esterase staining,a‐NAE

一、实验目的

掌握α‐醋酸萘酚酯酶染色的原理和临床意义,了解α‐醋酸萘酚酯酶染色的方法、结果判断和注意事项。

二、实验原理

血细胞内的α‐醋酸萘酚酯酶(α‐NAE)能将基质液中的α‐醋酸萘酚水解产生α‐萘酚,α‐萘酚再与基质液中的重氮盐(坚牢蓝B)偶联,生成灰黑或棕黑色沉淀物,定位于胞质中。

三、实验器材

新鲜骨髓片、显微镜、染色缸、水浴箱、擦镜纸。

四、实验试剂

1.固定液:10%甲醛生理盐水。

2.α‐醋酸萘酯酶丙酮液:α‐乙酸萘酯1g,加丙酮和蒸馏水1∶1混合液100ml,溶解后,4℃保存(可保存1年)。

3.0.067mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.6):Na2HPO4(即Na2HPO42.388g溶解于100ml水)87ml,再加KH2PO4(即0.908g KH2PO4溶解于100ml水)13ml,混匀,用1mol/L HCL调pH至7.6。

4.基质液:0.067mol/L磷酸盐缓冲液80.0ml,缓慢滴加α‐醋酸萘酯丙酮液1.6ml,边加边用力振摇,振荡15min后,加坚牢蓝B80mg,剧烈振摇15 min,立即过滤,滤液分成两杯,各40ml。

5.氟化钠基质液:氟化钠(NaF)61mg加入到上述其中1杯基质液中,溶解,混匀,作氟化钠钠抑制试验用。

6.10g/L甲绿溶液。

五、实验方法

1.新鲜骨髓片上滴加10%甲醛生理盐水,固定5min,用自来水轻轻冲洗,以防血膜脱落,晾干。

2.将涂片放入基质液染色缸中,37℃水浴1h,水洗,待干。

3.用10g/L甲绿溶液复染5~10min,水洗,待干,用油镜镜检。

4.氟化钠(NaF)抑制试验:将上述步骤中基质液换成氟化钠基质液,其余按本染色法进行,染色步骤同上。

5.结果判断:在胞浆内若有棕黑色或灰黑色弥漫性颗粒沉淀者为阳性,胞浆黄色者为阴性。

6.结果报告:两种方法染色后用油镜计数100或200个被检细胞,分别计算出抑制前和抑制后的阳性率和积分。按以下公式计算出抑制率:

氟化钠抑制率=[(抑制前-抑制后)/抑制前]阳性率或阳性积分×100%

六、注意事项

1.坚牢蓝B和氟化钠可小包分装后干燥器保存。

2.基质液配制过程中要振摇,以促使基质溶解。冬天配制时应适当加温(可置于37℃水箱操作)。基质液现配现用,不能保存,过滤后应尽快试验,以免大量沉淀物析出,影响染色效果。

3.重氮盐的选择以坚牢蓝B、坚牢蓝RR和坚牢黑B的染色效果为好。

七、结果报告

八、临床意义

1.单核细胞和组织细胞呈强阳性,但可被氟化钠抑制;巨核细胞及血小板呈阳性,早幼粒细胞白血病时早幼粒细胞可阳性,且不受氟化钠抑制。

2.粒细胞、淋巴细胞一般为阴性,若有弱阳性也可被氟化钠抑制。

3.临床鉴别:主要用于鉴别急性单核细胞白血病与急性粒细胞白血病,前者NSE阳性,且受氟化钠(NaF)抑制或部分抑制(见彩图2‐6、2‐7);而后者多数为阴性,若有阳性也不受氟化钠抑制。

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