病毒感染细胞的详细步骤

一、病毒感染的实验室检查

(一)显微镜检查

取含有病毒的组织细胞或其他含病毒的材料，制成涂片或组织切片，染色后用光学显微镜观察细胞中的病毒包涵体、细胞的病变(细胞变形、变性、坏死或出现多核巨细胞等)。或用电子显微镜和免疫电镜观察病毒的形态及结构。

(二)病毒的分离培养

1．病毒标本的采取与送检原则　尽早采集标本，以提高检出率。根据不同病毒感染采取不同部位的标本，如血液、粪便、鼻咽洗液、脑脊液以及病灶组织等。标本采集必须严格无菌操作，对本身带有杂菌的标本，应使用高浓度抗生素处理。采集的标本应及时送检，否则必须冷藏或用50%甘油缓冲盐水保存。血清学检查的标本应采集发病早期与恢复期的双份血清，以对比观察血清中抗体效价的动态变化。

2．病毒的分离培养

(1)动物接种:实验室用于分离病毒的动物有小白鼠、家兔、猴等。根据病毒种类不同，选择敏感动物、恰当的接种途径及部位(鼻内、皮内、皮下、脑内、腹腔内等)接种。接种后的动物隔离饲养，每日观察和记录动物发病情况。若动物发病或死亡，则取病变组织，剪碎、制成悬液后继续传代与鉴定。

(2)鸡胚培养:鸡胚可用来分离培养多种病毒，按病毒不同种类，选择不同日龄的鸡胚以及适当的接种部位和途径进行接种。常用方法有羊膜腔接种、尿囊腔接种、绒毛尿囊腔接种及卵黄囊接种。接种后将鸡胚置于35℃恒温箱培养，观察鸡胚的病变及羊水、尿囊液中有无红细胞凝集现象。

(3)组织细胞培养:是目前最常用的病毒培养方法。常用的组织细胞有人胚肾细胞、人胎盘羊膜细胞、人胚二倍体细胞、鸡胚等原代细胞及传代细胞(Hela细胞、HWP－2和KB细胞)等。病毒接种后，经孵育，在光镜下可观察细胞的病变情况以鉴定病毒。

(三)血清学试验

根据抗原与抗体特异性结合的原理，可用已知抗体测定未知病毒抗原，亦可用已知病毒抗原检测病人血清中相应抗体。因IgM出现早、消失快，故检测特异性IgM，可早期快速诊断某病毒性疾病。而IgG出现晚，在机体内持续时间长，检测特异性IgG可作为曾经感染过某种病毒的指标。血清学试验常用的方法有ELISA、免疫荧光法、放射免疫法、免疫印迹法、红细胞凝集抑制试验等。

(二)病毒核酸的检测

1．病毒核酸杂交技术　用同位素标记一条已知序列单链核酸作为探针，与固定在硝酸纤维素滤膜上变性单链核酸杂交，通过杂交信号的检测，鉴定标本中有无相应的病毒基因存在，并可测定其分子大小，以诊断病毒性疾病。常用的方法有斑点杂交法、原位杂交法、southern印迹法等。

2．聚合酶链反应(PCR)　是一种体外基因扩增技术，可用来检测标本中的病毒基因。方法是先提取标本中未知的核酸，根据待测病毒为RNA病毒或DNA病毒而加入RNA或DNA，对RNA则需先转录成互补的DNA，加入耐热的DNA多聚酶后，在一定温度及条件下作PCR。通过扩增病毒基因片段可诊断标本中是否存在病毒核酸。