显微测量法

实验二　显微测量法

细胞的大小，一般可用显微测微尺加以测量，显微测微尺由目镜测微尺和镜台测微尺组成，两尺配合使用。目镜测微尺是放入目镜内的标尺，其上刻有50或100个等分的刻度，每一刻度（小格）的长度是随物镜放大倍数而改变。镜台测微尺放置于载物台上，其刻度的每格长度是已知的。在使用时候，在所采用的放大倍数的物镜下，用镜台测微尺标定目镜测微尺，换上需测量的标本，用目镜测微尺测量微小物体的长度。

一、实验目的

（1）掌握光学显微镜的使用方法。

（2）掌握显微测微尺的使用方法。

二、实验原理

目镜测微尺是一个放在目镜像平面上的玻璃圆片。圆片中央刻有一条直线，此线被分为若干格，每格代表的长度随不同物镜的放大倍数而异，用前必须测定。镜台测微尺是在一个载片中央封固的尺，长1mm（1 000μm），被分为100格，每格长度是10μm（图2－1）。

图2－1　目镜测微尺的标定

注：A.目镜测微尺；B.镜台测微尺。

三、实验用品

普通光学显微镜、显微测微尺、洋葱根尖切片标本。

四、实验内容

（1）将目镜测微尺装入目镜筒中，观察目镜测微尺的刻度。

（2）将镜台测微尺放在显微镜的载物台上夹好，先用低倍镜，找到镜台测微尺的刻度。每一大格为0.1mm，每一小格为0.01mm（即10μm）。

（3）小心转动目镜测微尺和移动镜台测微尺，使两标尺平行。在视野中使镜台测微尺任一刻度线与目镜测微尺的任一刻度线重合为起点，沿两标尺平行方向，再找到另一重合刻度线为终点，记录下两重合线这一区段标尺各自的格数，即可算出目镜测微尺每小格代表的长度。

（4）计算目镜测微尺每格代表的长度：

目镜测微尺每小格代表的长度＝镜台测微尺的格数÷对应目镜测微尺的格数×10μm。

例如，低倍镜下所标定的目镜测微尺的全长为50格，相当于镜台测微尺的68格，即可求出目镜测微尺每小格等于13.6μm。

50/68＝1/x，x＝1.36格；1.36×10（μm）＝13.6（μm）（5）测量：取下镜台测微尺，换上需要测量的玻片标本，用目镜测微尺的刻度来测量细胞长度（格数），所得的细胞长度（格数）乘以每刻度的微米数（μm），即为细胞的实际长度。

（6）在测量过程中，为了避免细胞之间误差，要求分别测量5个细胞的长径和短径，列表记录并算出其平均值。

计算细胞、细胞核体积的公式：圆形细胞的体积V＝4/3πr³（r为半径）；椭圆形V＝4/3πab²（a、b为长、短半径）；核质比N/D＝Vn/（Vc－Vn），Vn为核的体积，Vc是细胞质的体积。

五、注意事项

如果选用不同倍数的物镜与目镜时，须重新计算目镜测微尺每格代表的长度，方法同前。

六、作业与思考题

（1）分别求出物镜4×，10×，40×时，目镜测微尺每格代表的长度。

（2）测5个洋葱细胞的长径和短径，列表记录并算出其平均值。