常见病原性细菌实验

实验任务四　常见病原性细菌实验

子任务一　常见病原菌形态观察

实验目的

能初步辨认镜下所见细菌形态、排列及染色性。

实验计划

（1）实验材料：常见病原菌染色标本片、光镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸等。

（2）实验步骤：将葡萄球菌、链球菌、脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、大肠埃希菌、痢疾志贺菌、霍乱弧菌、结核分枝杆菌、白喉棒状杆菌等染色标本片置于光镜油镜下观察，注意观察细菌的大小、形态、排列及染色性等特征。

（3）注意事项：①观察细菌须用油镜头，勿将其他镜头浸入油内。②不可斜置光镜，以防香柏油污染光镜。③勿将标本中的染料等杂质误认为细菌。

实验实施

（1）实验途径：①实验形式：示教/操作。②操作形式：分组操作（4～6人/组）。

（2）实验结果：记录实验结果及实验过程中出现的问题。

（3）实验报告：用彩笔绘出镜下所见细菌形态，并标明其染色性及放大倍数。

实验评价

能否正确说出镜下细菌的形态、排列及染色性（镜下观察）？

子任务二　病原性球菌及肠道杆菌培养物观察

实验目的

（1）学会观察细菌在固体培养基上的生长现象。

（2）能描述各种细菌的菌落特征。

实验计划

1.实验材料

病原性球菌血琼脂平板培养物、肠道杆菌SS琼脂平板及伊红美蓝琼脂平板培养物。

2.实验步骤

（1）病原性球菌培养物观察：观察经37℃恒温培养18～24h后的金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌及肺炎链球菌在血琼脂平板上所形成的菌落特征，注意每种细菌单个菌落的形态、大小、边缘、光滑度、湿润度、透明度、颜色及溶血性等菌落特征。

（2）肠道杆菌培养物观察：将大肠埃希菌、痢疾志贺菌及伤寒沙门菌分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板、SS琼脂平板等肠道选择培养基表面，置于37℃温箱培养18～24h后观察结果。注意对比各种细菌菌落形态、大小、透明度及颜色等菌落特征。

3.注意事项

不可用手触摸菌落，以防感染发生。

实验实施

（1）实验途径：①实验形式：示教/操作。②操作形式：分组操作（4～6人/组）。

（2）实验结果：记录实验结果及实验过程中出现的问题。

（3）实验报告：记录各种细菌在培养基中的菌落特征。

实验评价

（1）观察细菌培养物的方法是否正确？

（2）能否准确描述各种细菌的菌落特征？

子任务三　血浆凝固酶试验——玻片法

实验目的

通过教师示教，初步认识血浆凝固酶试验的临床意义。

实验计划

1.实验原理

金黄色葡萄球菌能产生血浆凝固酶，使血浆中的纤维蛋白原转变为纤维蛋白，致含有抗凝剂的人或家兔血浆发生凝固。本实验主要用于鉴定致病性葡萄球菌。

2.实验材料

金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌血琼脂平板18～24h培养物、兔血浆、生理盐水、毛细滴管、试管架、接种环、载玻片、酒精灯、火柴、玻璃蜡笔、消毒缸等。

3.实验步骤

（1）取洁净载玻片1张，用玻璃蜡笔在载玻片中部划1条直线，将玻片分为左、右两侧。

（2）用毛细滴管吸取生理盐水，于载玻片左、右两侧各滴加1滴生理盐水。

（3）用无菌接种环挑取金黄色葡萄球菌菌苔少许，置于载玻片左侧生理盐水中研磨成均匀的细菌悬液；用同样的方法挑取表皮葡萄球菌菌苔少许，置于载玻片右侧生理盐水中研磨或均匀的细菌悬液，观察有无自凝现象。

（4）若无自凝，用毛细滴管吸取兔血浆，于载玻片两侧细菌悬液中各滴加1滴兔血浆，混匀。2min内若出现颗粒状凝集现象，即为血浆凝固酶试验阳性；不凝集者为血浆凝固酶试验阴性。

4.注意事项

（1）注意无菌操作，防止细菌迸溅，接种环在使用前、后必须在酒精灯的火焰上烧灼灭菌。

（2）实验完毕后，不得擅自处理实验所用载玻片，不得直接将载玻片上的细菌悬液冲入水池，应放入指定的消毒缸内，统一进行消毒、处理。

实验实施

（1）实验途径：①实验形式：示教/操作。②操作形式：分组操作（4～6人/组）。

（2）实验结果：金黄色葡萄球菌能产生血浆凝固酶，血浆凝固酶试验为阳性；表皮葡萄球菌不能产生血浆凝固酶，血浆凝固酶试验为阴性。

（3）实验报告：记录、分析实验结果，说出其临床意义。

实验评价

（1）接种环的使用方法是否正确？

（2）取菌量是否合适？

（3）结果判断是否准确？

许　丽