医学原虫与医学节肢动物实验

实验任务六　医学原虫与医学节肢动物实验

子任务一　医学原虫实验

实验目的

（1）学会观察溶组织内阿米巴滋养体、包囊及间日疟原虫红细胞内期各阶段的形态特征。

（2）能识别阴道毛滴虫滋养体、蓝氏贾第鞭毛虫以及弓形虫的形态特征。

（3）初步识别恶性疟原虫环状体及配子体形态特征。

（4）初步学会疟原虫厚血膜玻片、薄血膜玻片的制作方法，粪便检查溶组织内阿米巴，排泄物及分泌物检查阴道毛滴虫。

实验计划

1.实验材料

间日疟原虫、恶性疟原虫、溶组织内阿米巴、弓形虫、蓝氏贾第鞭毛虫及阴道毛滴虫的玻片标本、排泄物、分泌物、尿液、碘液、75%乙醇、采血针、玻棒、脱脂棉球、姬氏染液、瑞氏染液、蒸馏水、载玻片、盖玻片、光学显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸、记号笔、竹签等。

2.实验步骤

1）形态观察

（1）阴道毛滴虫（示教）：阴道毛滴虫玻片标本（姬氏染色）观察（示教）：油镜下观察阴道毛滴虫滋养体的形态、大小、波动膜、鞭毛（4根前鞭毛与1根后鞭毛）、核和轴柱的结构特点。

（2）疟原虫（示教）：间日疟原虫薄血膜玻片标本（瑞氏或姬氏染色）观察：先在低倍镜下观察间日疟原虫薄血膜玻片，舌形部分（受染的红细胞多分布在此部位），找到红细胞分布均匀、疏密适当、着色正常的区域，换油镜观察。应逐个视野依次观察，注意应在胀大、变形、变浅的红细胞内寻找疟原虫。疟原虫胞质染成蓝色，核染成红色，疟色素呈棕褐色。恶性疟原虫薄血膜玻片标本（瑞氏或姬氏染色）观察：注意观察环状体、配子体的形态特征，并注意与间日疟原虫相鉴别。

（3）溶组织内阿米巴（示教）：溶组织内阿米巴大滋养体玻片标本（铁苏木素染色）观察：油镜下观察溶组织内阿米巴大滋养体的形态、大小；注意内质、外质的分界；内质中被吞噬的红细胞或组织细胞；虫体伸出的伪足特点；细胞核的形状、核仁及染色质粒的大小与分布情况。溶组织内阿米巴包囊玻片标本（碘液染色）观察：油镜下观察溶组织内阿米巴包囊的形态、大小、染色、核的数目以及未成熟包囊内的拟染色体及糖原泡的形状等。

（4）蓝氏贾第鞭毛虫玻片标本观察（示教）：油镜下观察蓝氏贾第鞭毛虫滋养体（铁苏木素染色）及包囊（碘液染色）的形态、大小、核的形态、轴柱及鞭毛等特征。

（5）弓形虫滋养体玻片标本（瑞氏染色或姬氏染色）观察（示教）：油镜下观察弓形虫的形态、大小、核的位置及染色性等特征。

2）医学原虫常用的诊断方法

（1）粪便检查溶组织内阿米巴（示教）。

将粪便涂成薄膜，碘液染色后可检查到溶组织内阿米巴的包囊。

粪便直接涂片查活滋养体：适用于诊断急性阿米巴痢疾，涂片方法同蠕虫卵的检查，粪便必须新鲜，涂片较薄，便于镜下观察滋养体的活动情况。检查时受气温影响很大，故天冷时应注意保温。

粪便直接涂片碘液染色查包囊：适用于慢性阿米巴痢疾及带虫者的诊断。染色结果：包囊染成黄色或黄绿色，糖原成棕红色，囊壁、核仁和拟染色体均不着色。

（2）排泄物及分泌物检查阴道毛滴虫（示教）。

阴道分泌物直接涂片法：在载玻片上滴加生理盐水1滴，用消毒棉签取阴道分泌物做涂片，检查活滋养体。低温时注意保温。

尿沉渣检查：对疑为泌尿生殖道感染阴道滴虫者，可取尿液2～3mL离心、沉淀，取尿沉渣涂片、镜检。

（3）血液检查疟原虫（示教）。

疟原虫寄生于红细胞内，采血制成涂片，染色后镜检查获原虫。厚血膜较厚、血量多、疟原虫较集中，易于检出，但因红细胞叠置或被溶解，难以辨认疟原虫形态以及虫体与被寄生红细胞间的关系。薄血膜中疟原虫形态典型，便于观察，但感染程度较轻时易漏检。

薄血膜玻片制作方法：用75%乙醇棉球消毒耳垂，右手持取血针、刺破皮肤，挤出血滴。在载玻片1/3与2/3交界处滴一小滴血，以一端缘光滑的载玻片为推片，将推片的一端置于血滴之前，待血液沿推片端缘扩散后，自右向左推成薄血膜。操作时两载玻片间的角度为30°～45°，推动速度适宜。理想的薄血膜，应是一层均匀分布的血细胞，血细胞间无空隙，且涂出的血膜末端呈扫帚状。

厚血膜玻片制作方法：另取一大滴血置于已涂有血膜的玻片一端空白处，以推片一角将血滴自内向外作螺旋状摊开，使之成为直径为8～10mm的圆形厚血膜。厚血膜为多层血细胞重叠，约等于20倍薄血膜的厚度。

上述薄血膜玻片、厚血膜玻片制好后，待薄血膜玻片、厚血膜玻片晾干，厚血膜玻片用蒸馏水溶血，再行瑞氏染色或姬氏染色，清水冲洗厚血膜玻片，晾干后镜检。

3.注意事项

油镜及玻片的保护。

实验实施

（1）实验途径：①实验形式：示教/操作。②操作形式：分组操作（4人/组）。

（2）实验结果：记录实验结果及实验过程中出现的问题。

（3）实验报告：绘出溶组织内阿米巴大滋养体、包囊镜下形态；绘出间日疟原虫红细胞内期各期镜下形态。

实验评价

玻片镜下是否找到正确的位置？厚血膜玻片、薄血膜玻片操作中的区别及注意事项。

子任务二　医学节肢动物实验

实验目的

（1）学会观察蚊、蝇的外形特征及主要结构。

（2）能识别蚤、虱、蜱、螨的基本形态。

实验计划

1.实验材料

蚊、蝇、蚤、虱、蜱及螨标本。

2.实验步骤

（1）蚊（示教）：成蚊（针插标本）观察：用放大镜观察成蚊头、胸、腹、翅（1对）及细而长的足（3对）的特征。3种蚊生活史各期的主要鉴别特征观察：用低倍镜观察卵、幼虫和蛹，用放大镜观察成虫。

（2）蝇（示教）：用放大镜观察各种蝇、蝇卵、幼虫、蛹的各期形态特征。

（3）其他医学节肢动物（示教）：用放大镜或低倍镜观察人蚤成虫、人头虱或体虱的玻片标本、硬蜱和软蜱的形态及硬蜱和软蜱的区别，用低倍镜观察人疥螨的成虫玻片标本。

实验实施

（1）实验途径：①实验形式：示教/操作。②操作形式：分组操作（4人/组）。

（2）实验结果：记录实验结果及实验过程中出现的问题。

实验评价

3种蚊的形态如何区分？

吴珍珍　齐永长