血清钙测定（－滴定法）

实验十八　血清钙测定（EDTA－Na₂滴定法）

一、实验目的与要求

1．了解血清离子钙在人体营养学上的意义及其在生理学上的重要性。

2．掌握EDTA滴定法测定血清离子钙的原理和方法。

二、实验原理

血清中的钙离子在碱性溶液中与钙红指示剂结合成可溶性的络合物，使溶液显红色。乙二胺四乙酸二钠（简称EDTA二钠）对钙离子的亲和力大，能与该络合物中的钙离子结合，使指示剂重新游离在碱性溶液中显蓝色。故以EDTA二钠滴定时，溶液由红色变为蓝色时，即表示终点达到。以同样方法滴定已知钙含量的标准液，从而计算出血清标本中钙的含量。

三、实验仪器与试剂

1．仪器

（1）50ml酸碱式滴定管；

（2）25ml烧杯；

（3）微量加样器；

（4）50ml锥形瓶。

2．试剂

（1）钙标准液（1ml相当于0．1mg钙）：取碳酸钙少量，置蒸发皿中，于110～120℃干燥2～4h，移入硫酸干燥器中冷却。精确称取干燥碳酸钙250．0mg于烧杯中，加蒸馏水40ml及1mol／L盐酸5ml溶解，移入1　000．0ml容量瓶，以蒸馏水洗烧杯数次，洗液一并倾入容量瓶，加蒸馏水稀释至1　000．0ml。

（2）EDTA－钠溶液：乙二胺四乙酸二钠150．0mg，1mol／L氢氧化钠溶液2．0ml，蒸馏水加至1　000．0ml。

（3）钙红指示剂：称取钙红0．1g，溶于甲醇20．0ml中。

（4）0．2mol／L氢氧化钠液。

四、实验步骤

1．取血清0．2ml放入25ml烧杯中；

2．加0．2mol／L氢氧化钠4ml和钙红指示剂3滴；

3．以标定过的EDTA溶液滴定，直至溶液由红色变为正蓝色为止；

4．记录EDTA的用量（ml）；

5．同时作一样品空白对照。

五、实验结果与分析

血清钙含量（mg%）＝（S－b）×T／0．2×100

式中：S———样品消耗EDTA溶液的毫升数；

　　　b———样品空白消耗EDTA溶液的毫升数。

六、实验报告

参照《营养学》、《生物化学》原理分析。

八、注意事项

1．试剂为空白对照；

2．每组样品做2～3个平行；

3．正常参考范围：2．25～2．75mmol／L（9～11mg／dl）。