全血血红蛋白测定（沙氏比色法）

实验二十　全血血红蛋白测定（沙氏比色法）

一、实验目的与要求

1．目的　测定人体血液中所含血红蛋白的百分含量（g／dl）或每升中的含量（g／L），间接评估人体Fe的营养状况。

2．要求　掌握经典的测定血红蛋白的方法———沙氏比色法及其基本的操作规程。

二、实验原理

含有Fe2＋的血红蛋白在稀盐酸中被还原成高铁血红蛋白（Fe3＋）的过程中，血液逐渐由鲜红色转变成褐色。10min后使血红蛋白还原充分，并用专用比色杯进行比色，杯中血液盐酸混合后，稀释至标准板同刻度。

三、实验仪器与试剂

1．仪器　4人一组，每组包括：

（1）沙氏比色计（血红蛋白计、血色素计）；

（2）20μl微量管；

（3）一次性采血针；

（4）手术镊；

（5）搪瓷盘。

2．试剂

（1）1%HCl；

（2）蒸馏水；

（3）酒精棉球。

四、实验步骤

1．将1%盐酸溶液注入沙氏比色方管内，到“20”刻度线。

2．取消毒的20μl微量塑料吸管。

3．迅速在指尖准确取血液20μl，棉球拭去吸管壁外围多余血液。

4．迅速将20μl血液注入方型沙氏比色管内的盐酸溶液中。

5．此20μl微量塑料吸管在1%盐酸溶液反复吸取或清洗3～4遍，充分摇匀。

6．静置10min左右，使沙氏比色管内的血液和盐酸混合液呈现棕褐色。

7．徐徐注入蒸馏水稀释，同时不断混匀，至沙氏比色管内液体的颜色与比色架上黄褐标准玻板色泽完全相同为止。

8．读取沙氏比色方管内液面（凹面），即为每百毫升血液中血红蛋白克数。

单位：g／L；g／dl。

五、实验结果与分析

六、实验报告

参照《营养学》、《生理学》原理分析。

七、注意事项

1．试剂为空白对照；

2．每组样品做2～3个平行实验；

3．正常参考范围：女性120～140g／L；男性120～150g／L。