改善缺铁性贫血功能实验

实验三十六　改善缺铁性贫血功能实验

一、实验目的与要求

缺铁性贫血是常见的营养缺乏病，发病遍及世界各国，特别是发展中国家最主要的营养问题之一，我国也是缺铁性贫血高发病率国家之一。据1992年第三次全国营养调查表明，我国缺铁性贫血患病率平均在20%，儿童、孕妇和老年人是重点人群。补充营养素是改善营养性贫血的主要措施之一。缺铁性贫血动物实验是评价改善营养性贫血症状的功能性实验。

通过学习，了解缺铁性贫血动物模型的建立和功能性实验方法。

二、实验原理

用低铁饲料喂养动物，建立缺铁性贫血实验动物模型。再给予受试样品，观察受试样品对血液生化的影响。根据实验结果，判定受试样品对改善营养性贫血的作用。

三、实验材料、方法与步骤

1．实验动物服用与分组　选用健康初断乳大鼠，单一性别，每组10～12只。

根据实验要求设计多个试验组（造模或服用受试样品）、正常对照组（正常动物，水对照）、阳性对照组以Fe元素计［2mg／（kg·BW）硫酸亚铁或乳酸亚铁造模后，服用水为对照］。

2．受试样品、剂量设计　设几个受试物样品剂量组（含0剂量组），设立正常和阳性对照组（以Fe元素计）；采用灌胃服用方法。

3．低铁饲料的制备

（1）EDTA处理酪蛋白：用去离子水配制1%EDTA－Na₂水溶液，将酪蛋白过20目筛，用1%EDTA－Na₂水溶液浸泡过夜，捞出酪蛋白放入布袋中，置洗衣机中脱水，反复用去离子水冲洗，直至完全洗干净酪蛋白中的EDTA－Na₂。脱水后，放入烘箱，80℃烘干，研磨成粉，过20目筛后备用。EDTA处理过的酪蛋白铁含量约为16．5mg／kg，未处理的酪蛋白铁含量约为131．1mg／kg。

（2）用鸡蛋粉代替酪蛋白：市售蛋清粉中的铁含量比多次用EDTA处理过的酪蛋白铁含量还低。通常市售蛋清粉中的铁含量为7．8～8．4mg／kg。

（3）低铁饲料配方采用美国营养学会推荐的配方，但不添加其中的铁化合物（表36－1～表36－3）。

表36－1　低铁饲料配方（修改的ANI－93G）

表36－2　混合盐成分

表36－3　混合维生素成分

4．试验步骤

（1）缺铁性贫血大鼠模型的建立：选用健康初断乳二级大鼠，体重50～60g。常规鼠料适应性饲养3～5天，饲喂低铁饲料及去离子水（或双蒸水）。自第3周开始每周选取部分大鼠采尾血测血红蛋白（Hb），直至多数动物的Hb低于100g／L时，测定全部大鼠的体重及血红蛋白。

（2）试验方法

①选取Hb＜100g／L的大鼠作为实验对象；

②造模后根据贫血大鼠血红蛋白水平和体重随机分组；

③灌服：试验组灌服不同剂量的受试样品；对照组灌服去离子水；

④受试样品给予30～45天，期间各组均继续饲喂低铁饲料；

⑤称重：以个体为单位，于入试前、结束时、试中每周称量体重一次；

（3）检测指标

①血红蛋白水平检测：以个体为单位，于入试前和试中每两周尾端采血测量；结束时乙醚麻醉，腹主动脉取血，测定各项血液学指标。

②红细胞内游离原卟啉。

③红细胞压积。

四、实验结果与分析

五、实验报告

六、注意事项

本实验的关键是缺铁性贫血动物模型的建立。

1．低铁饲料铁含量设计为9mg／kg以下，采用分析纯试剂。

2．动物饮用水用去离子水或双蒸水。

3．实验过程严禁外源铁污染。