实验室检测抗体的免疫学技术

实验十三　免疫印迹技术

免疫印迹技术是将高分辨率的聚丙烯酰胺凝胶电泳与抗原抗体特异性结合相结合的一项免疫分析技术，现已被广泛应用于生命科学研究领域。

实验目的

（1）掌握免疫印迹技术的原理、基本操作步骤及用途。

（2）了解抗核抗体检测的临床意义。

实验原理

十二烷基磺酸钠（SDS）_－聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）可将混合物中各蛋白成分按分子量大小分离，通过电转移将凝胶中所有分离开的蛋白成分转移到硝酸纤维素膜（NC）上，并与患者血清共同孵育。如患者血清中有相应抗体，则会与抗原结合，加入酶标记的抗人IgG进行第二次孵育，洗涤后加入底物，观察最终产物颜色的改变。

实验材料

（1）待检血清，阳性对照血清。

（2）印迹有多种纯化核抗原的膜条，酶标记的羊抗人IgG抗体，显色剂A、B，样本缓冲液，洗涤缓冲液。

（3）恒温箱，摇摆脱色摇床，吸管，微量移液器，反应槽等。

实验方法

（1）将膜条放入反应槽内，加入已稀释的待检血清1mL，于室温下摇动孵育30min。

（2）取出反应槽，吸尽液体，加入洗涤缓冲液1mL，摇动洗涤3次，每次5min。

（3）吸尽洗涤液，加入已稀释的酶标记抗人IgG抗体，混匀后室温摇动孵育30min。

（4）同上洗涤后，加入显色剂A和B，混匀，室温条件下摇动显色10min，蒸馏水洗涤3次，自然干燥后观察结果。

实验结果

将实验膜条与结果判读膜条进行比对，若出现均匀、清晰的反应条带，则待检血清含有相应位置抗原的特异性抗体；若未出现颜色反应，则为阴性，无相应特异性抗体。

注意事项

此种检测有商品试剂盒，可参照试剂盒中标准图谱进行结果判定。

思考题

（1）免疫印迹技术的基本原理为何？有哪些实际应用？

（2）酶联免疫吸附测定和免疫印迹技术，在操作方法及应用上有何异同？

（李　霞）

参考文献

［1］刘辉．临床免疫学与检验实验指导［M］．3版．北京：人民卫生出版社，2010．

［2］曾常茜，陶志华．临床免疫学检验实验指导［M］．2版．北京：中国医药科技出版社，2010．