实验七 胶体金免疫层析法(GICA)检测早孕实验
实验目的
(1)掌握胶体金免疫层析法测定HCG的实验原理。
(2)熟悉胶体金免疫层析法测定HCG操作方法及应用。
实验原理
GICA的特点是可进行单份标本检测,简便、快速、不需任何仪器设备。GICA多用于检测抗原,但也可用于检测抗体。
人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,HCG)是由妊娠妇女滋养层细胞合成分泌的一种糖蛋白激素,在水中极易溶解,可从尿中排出。现以GICA诊断试纸条检测妊娠妇女尿中HCG为例,介绍其实验原理。
如图4-1所示。
B为样本垫:吸水材料,加标本处。
C为结合垫:胶体金标记抗HCG-α单克隆抗体,干燥、压缩、吸附在吸水材料上。
图4-1 金免疫层析实验原理示意图
T为检测区:包被抗HCG-β单克隆抗体。
R为质控区:包被抗小鼠IgG抗体。
A为吸水垫:吸水材料。
当待检标本加到试纸条一端的样本垫上后,通过层析作用,尿液从B端向A端移动,流经C区时将胶体金标记抗HCG-α单克隆抗体复溶,若尿液中含HCG,即形成胶体金标记抗HCG-α单克隆抗体-HCG复合物。该复合物继续移行至T区,再与固相的抗HCG-β单克隆抗体结合,形成胶体金标记抗HCG-α单克隆抗体-HCG-抗HCG-β单克隆抗体双抗体夹心复合物并大量聚集,在T区显示红色线条,为阳性反应。多余的胶体金标记抗HCG-α单克隆抗体移行至R区时被抗小鼠IgG抗体捕获,而显示出红色质控线条。若尿液中不含HCG,在T区不出现红色线条,仅在R区出现红色质控线条,实验结果为阴性。若R区无红色线条出现,表示实验无效。
实验材料
金免疫层析试纸条、待检尿液、试管等。
实验方法
沿铝箔袋切口部位撕开,取出试纸条。将试纸条B端浸入尿液中,至少3s后取出平放,5min内观察显示结果(见图4-2)。
图4-2 金免疫层析实验结果示意图
实验结果
阳性:在T区(检测区)及R区(质控区)各出现一条红色反应线。
阴性:仅在R区(质控区)出现一条红色反应线。
无效:试纸条无红色反应线出现,或仅在T区(检测区)出现一条红色反应线,表明实验失败或试纸条失效。请用新试纸条重试。
注意事项
(1)试纸条应室温(4~30℃)避光密封干燥储存,切勿冰冻。
(2)标本、试纸条或其他检测用材料等均在室温平衡。
(3)试纸条插入尿液深度不可超过MAX标志线。
思考题
(1)为什么质控区(R)应用抗小鼠IgG抗体包被?
(2)ICA检测HCG的实验原理及临床意义。
(王 静)
参考文献
[1]于修平.医学免疫学与微生物学实验[M].北京:科学出版社,2007.
[2]王兰兰,吴健民.临床免疫学与检验[M].4版.北京:人民卫生出版社,2008.
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