检测早孕实验

实验七　胶体金免疫层析法（GICA）检测早孕实验

实验目的

（1）掌握胶体金免疫层析法测定HCG的实验原理。

（2）熟悉胶体金免疫层析法测定HCG操作方法及应用。

实验原理

GICA的特点是可进行单份标本检测，简便、快速、不需任何仪器设备。GICA多用于检测抗原，但也可用于检测抗体。

人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin，HCG）是由妊娠妇女滋养层细胞合成分泌的一种糖蛋白激素，在水中极易溶解，可从尿中排出。现以GICA诊断试纸条检测妊娠妇女尿中HCG为例，介绍其实验原理。

如图4－1所示。

B为样本垫：吸水材料，加标本处。

C为结合垫：胶体金标记抗HCG－α单克隆抗体，干燥、压缩、吸附在吸水材料上。

图4－1　金免疫层析实验原理示意图

T为检测区：包被抗HCG－β单克隆抗体。

R为质控区：包被抗小鼠IgG抗体。

A为吸水垫：吸水材料。

当待检标本加到试纸条一端的样本垫上后，通过层析作用，尿液从B端向A端移动，流经C区时将胶体金标记抗HCG－α单克隆抗体复溶，若尿液中含HCG，即形成胶体金标记抗HCG－α单克隆抗体－HCG复合物。该复合物继续移行至T区，再与固相的抗HCG－β单克隆抗体结合，形成胶体金标记抗HCG－α单克隆抗体－HCG－抗HCG－β单克隆抗体双抗体夹心复合物并大量聚集，在T区显示红色线条，为阳性反应。多余的胶体金标记抗HCG－α单克隆抗体移行至R区时被抗小鼠IgG抗体捕获，而显示出红色质控线条。若尿液中不含HCG，在T区不出现红色线条，仅在R区出现红色质控线条，实验结果为阴性。若R区无红色线条出现，表示实验无效。

实验材料

金免疫层析试纸条、待检尿液、试管等。

实验方法

沿铝箔袋切口部位撕开，取出试纸条。将试纸条B端浸入尿液中，至少3s后取出平放，5min内观察显示结果（见图4－2）。

图4－2　金免疫层析实验结果示意图

实验结果

阳性：在T区（检测区）及R区（质控区）各出现一条红色反应线。

阴性：仅在R区（质控区）出现一条红色反应线。

无效：试纸条无红色反应线出现，或仅在T区（检测区）出现一条红色反应线，表明实验失败或试纸条失效。请用新试纸条重试。

注意事项

（1）试纸条应室温（4～30℃）避光密封干燥储存，切勿冰冻。

（2）标本、试纸条或其他检测用材料等均在室温平衡。

（3）试纸条插入尿液深度不可超过MAX标志线。

思考题

（1）为什么质控区（R）应用抗小鼠IgG抗体包被？

（2）ICA检测HCG的实验原理及临床意义。

（王　静）

参考文献

［1］于修平．医学免疫学与微生物学实验［M］．北京：科学出版社，2007．

［2］王兰兰，吴健民．临床免疫学与检验［M］．4版．北京：人民卫生出版社，2008．