超敏反应性疾病的免疫检测

单元二　超敏反应性疾病的免疫检测

一、I型超敏反应常见疾病及检测

（一）Ⅰ型超敏反应的临床常见疾病

Ⅰ型超敏反应疾病是一类常见病和多发病，临床发病率高，严重时会危及生命，如不及时抢救会导致死亡，应引起高度重视。临床上常见的疾病有如下几种。

1.过敏性休克

过敏性休克是最严重的一种Ⅰ型超敏反应性疾病，主要由用药物或注射异种血清引起。

（1）药物过敏性休克：变应原以青霉素最为常见。此外，还有头孢霉素、链霉素、普鲁卡因等。青霉素本身无免疫原性，但其降解产物青霉噻唑醛酸或青霉烯酸易与体内组织蛋白结合，形成青霉噻唑醛酸蛋白或青霉烯酸蛋白后，可刺激机体产生特异性IgE抗体，使肥大细胞和嗜碱性粒细胞致敏。当再次接触青霉素降解产物结合的蛋白时，即可结合靶细胞表面特异性IgE而触发过敏反应，重者可发生过敏性休克甚至死亡。青霉素制剂在弱碱性溶液中易形成青霉烯酸，因此使用青霉素时应临用前配制，不可放置后使用。

（2）血清过敏性休克：血清过敏性休克又称血清过敏症或再次血清病。常发生于既往曾用过动物免疫血清，机体已处于致敏状态而再次接受同种动物免疫血清的个体。临床上使用破伤风抗毒素或白喉抗毒素进行治疗或紧急预防时，可出现此种反应。近年来由于异种免疫血清的纯化，此类过敏反应临床上已少见。

2.呼吸道过敏反应

（1）支气管哮喘：好发于儿童和青少年，有明显的家族史。多为吸入或食入变应原后发生的支气管平滑肌痉挛、气管变应性炎症，患者可出现胸闷、哮喘、呼吸困难等症状。

（2）变应性鼻炎：主要因吸入植物花粉致敏引起，患者表现有腺体分泌物增加，鼻黏膜苍白水肿、流涕、打喷嚏等。具有明显的季节性和地区性特征。

3.消化道过敏反应

少数人在食入鱼、虾、蛋、乳、蟹、贝等食物后可发生恶心、呕吐、腹痛和腹泻等症状为主的过敏性胃肠炎。严重者可出现过敏性休克。

4.皮肤过敏反应

可因药物、食物、花粉、肠道寄生虫及寒冷刺激等引起，主要表现为荨麻疹、湿疹和血管神经性水肿。原因是组胺、激肽等介质使皮肤真皮内小血管扩张、通透性增加，从而出现局限性水肿反应，有风团、红斑、瘙痒等症状。

（二）免疫学检验

1.过敏原皮肤试验　皮肤试验简称皮试，是在皮肤上进行的体内免疫学试验。当试验抗原进入致敏者皮肤时，皮肤中结合有IgE的肥大细胞或致敏T细胞就会与试验抗原结合，引发试验局部皮肤超敏反应。皮肤试验的最常用部位是前臂屈侧，因此处皮肤较为光滑细腻，而且便于试验操作和结果观察。按正规作法，左右两臂一侧做试验，另一侧作对照。需要时也可选用上臂或背部皮肤。

（1）试验类型及方法：常用的有皮内试验和挑刺试验。

①皮内试验：将试验抗原与对照液各0.01～0.03mL用皮试针头分别注入皮内，使局部形成一个圆形小丘。如同时试验多种抗原时，相互间隔至少4cm，以免强烈反应时互相混淆结果。皮内试验是检测Ⅰ型超敏反应最常应用的方法，具有准确、应用范围广、敏感度比其他皮试方法敏感度高的特点。

②挑刺试验：也称点刺试验或刺痕试验。将试验抗原与对照液分别滴于试验部位皮肤上，用针尖透过液滴在皮肤上轻轻地挑刺一下，以刺破皮肤但以不出血为度，让可疑致敏原渗入皮肤，1min后拭（吸）去抗原溶液。同时试验多种抗原时，千万注意不要将不同的抗原液交叉混合，以免出现假阳性。

挑刺试验主要用于Ⅰ型变态反应，该法虽比皮内试验法敏感性稍低，但假阳性较少，与临床及其他试验的相关性较强。

（2）结果判定及分级标准：观察结果应在皮试后的15～30min内进行，皮内试验的阳性反应以风团为主，挑刺试验的阳性反应以红晕为主，其判定标准及分级见表11－1。

表11－1　速发型皮肤试验的结果判定标准

（3）应用与评价：皮肤试验属于活体试验，虽然影响因素众多，但此试验能反映机体的实际免疫状态，并且简单易行，结果的可信度大；这些优点是其他方法难以替代的，所以在临床和防疫工作中经常应用。临床上常用于以下情况。

①寻找过敏原：过敏反应防治的重要原则之一是回避过敏原，而回避的前提是明确过敏原。确定过敏原的常用方法是各种类型的皮肤试验。例如，支气管哮喘和荨麻疹等均可用皮肤试验来帮助诊断。但食物过敏与皮肤试验的相关性较差，这可能是因为食物的抗原提取液与肠吸收的物质有所不同，或食物过敏并非IgE所介导；而且食物过敏的变应原容易发现，一般不必做皮肤试验。

②预防用药过敏：对患者首次注射某批号的青霉素、链霉素、疫苗或其他易过敏药物之前，必须做过敏试验；如果患者呈阳性反应（即使是可疑阳性），就应更换其他抗生素。注射异种抗血清（例如抗破伤风血清和抗狂犬病血清）前也必须做过敏试验，如果呈阳性反应就需要换用精制抗体，或进行脱敏治疗（采用小剂量、短间隔、连续多次注射抗毒素的方法进行脱敏，然后再大量注射进行治疗，不致发生超敏反应）。

2.血清lgE的检测　IgE是介导Ⅰ型超敏反应的抗体，因此检测血清总IgE和特异性IgE对Ⅰ型超敏反应的诊断和过敏原的确定很有价值。

（1）血清总IgE的测定：正常情况下血清IgE仅在ng/mL水平，婴儿脐带血IgE小于0.5kμ/L，成人血清IgE水平在20～200kμ/L（1μ＝2.4ng）。用常规测定IgG或IgM的凝胶扩散法检测不出IgE，必须用高敏感度的方法进行检测。

①酶联免疫测定法：测定血清IgE时也常用ELISA双抗体夹心法，操作方便，敏感性高，在临床上经常应用。

②放射免疫吸附试验：将抗IgE吸附到固相载体上用以检测血清IgE的方法，故又称固相放射免疫测定。临床常用双抗体夹心法，多以滤纸为载体。将抗IgE抗体偶联到经溴化氰活化的滤纸上，使其与待检血清及IgE参考标准进行反应；洗涤后加入125I标记的抗人IgE，再经洗涤后测定滤纸片的放射活性，其测定值与标本中的IgE含量成正相关。该法敏感性高，但需制备放射性核素标记物，γ计数设备条件，有放射性核素污染的危险。

③化学发光法：用化学发光物质标记抗IgE，与血清中的IgE反应后，通过化学发光分析，计算出IgE含量。此法敏感性和特异性均较好。

（2）特异性IgE的测定：特异性IgE是指能与某种过敏原特异性结合的IgE，需用纯化的变应原去检测相应的IgE抗体，是体外确定变应原的试验，特异性强。常用于进一步确证，或有严重过敏史，不易做体内试验者，也可用于脱敏疗效观察，但检测费用高，费时。

①放射免疫吸附试验（RAST）：将纯化的特异性变应原与固相载体结合，加入待检血清及参考对照，再与同位素标记的抗IgE抗体反应，然后测定固相的放射活性，通过标准曲线求出待检血清中特异性IgE的含量，或大于正常人血清3.5倍即判为阳性。

②酶联免疫吸附试验：原理及步骤基本同RAST，仅是最后加入酶标记的抗IgE，利用酶底物进行显色。测定结果的表示也与RAST相同。

③CAP检测系统：CAP为一个很小的塑料帽状物，其内置有多孔性、弹性和亲水性的纤维素粒，吸附了变应原，加人血清，血清中的IgE就会和变应原结合，再加入酶标抗人IgE，再加入荧光显色系统，在荧光分光光度计上测定荧光强度，计算机提供相应软件，自动计算出结果，报告IgE含量。

3.嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞的检测

（1）嗜酸性粒细胞计数：可用白细胞分类计数法，也可以用苯酚甲醛伊红染色直接计数法，目前多采用后者。因该染液为低渗可溶解红细胞和其他白细胞，而嗜酸性粒细胞胞质颗粒中富含碱性蛋白，易与该染料结合着色。嗜酸性粒细胞是Ⅰ型超敏反应的重要炎症细胞，外周血嗜酸性粒细胞计数对Ⅰ型超敏反应性疾病的辅助诊断和疗效有一定价值。

（2）嗜碱性粒细胞计数：常用酸性染色液（含肝素、阿利新蓝、硫酸铝等）染色后直接计数。嗜碱性粒细胞参与Ⅰ型超敏反应，可作为Ⅰ型超敏反应的筛选试验，也可作为疗效考察的辅助指标。

（3）嗜碱性粒细胞脱颗粒试验：正常嗜碱性粒细胞的胞质内含有大量碱性颗粒，能被碱性染料如甲苯胺蓝或阿利新蓝染色，极易辨认和计数。当加入变应原或抗IgE抗体后，与细胞表面的IgE结合而使细胞浆颗粒脱出，细胞不再着色，从染色细胞数的减少可以判断脱颗粒的情况，从而推测患者是否对该变应原过敏。常用白细胞计数板计数，与不加变应原浸液对照，嗜碱性粒细胞减少30%以上即判为阳性。该法重复性好，可用于寻找变应原及判定脱敏疗效。

二、Ⅱ型超敏反应常见疾病及检测

（一）Ⅱ型超敏反应的临床常见疾病

1.输血反应　输血反应是指输血时因血型不合所引起的血细胞破坏，有溶血性和非溶血性两类。如ABO血型不合的输血，可导致红细胞大量破坏，即溶血性输血反应。非溶血性输血反应是由于反复输入异型HLA的血液，在受者体内诱发抗白细胞、抗血小板抗体或抗血浆蛋白抗体，导致白细胞和血小板破坏。

2.新生儿溶血症　新生儿溶血症多发生于孕妇为Rh^－，胎儿Rh^＋，尤其是再次妊娠的胎儿。当第一胎分娩时，胎盘剥离出血，极少量胎儿Rh^＋的红细胞进入母体，刺激母体产生后天获得性Rh^＋抗体（IgG）。若该母亲怀第二胎，胎儿仍为Rh^＋时，母体的Rh＋抗体可通过胎盘进入胎儿体内，并与Rh^＋红细胞结合，激活补体及相关细胞，导致红细胞破坏，引起新生儿溶血症。

新生儿溶血症也可由母胎ABO血型不符合引起。多发生于母亲是O型血，胎儿是A型或B型者，其发生率高于Rh血型不符，但症状较轻。目前尚无有效的预防办法。

3.免疫性血细胞减少症　应用某些药物或因病原微生物（如EB病毒）感染，可通过Ⅱ型超敏反应机制造成血细胞破坏。临床上常见的有非那西汀、对氨基水杨酸、异烟肼、青霉素等引起的溶血性贫血，奎尼丁、氯霉素、磺胺等引起的粒细胞减少症，利眠宁、苯海拉明等引起的血小板减少性紫癜以及流感病毒、甲基多巴或其类似药物等所致的自身免疫性溶血性贫血。

4.肺出血－肾炎综合征　肺出血－肾炎综合征又称Good pasture’s综合征，是由病毒感染等因素造成肺泡壁基底膜变构诱生自身抗体，又因肾小球基底膜与肺泡壁基底膜具有共同抗原，故二者可同时受到上述自身抗体的作用，发生免疫损伤，导致咯血、贫血、血尿、蛋白尿以及进行性肾功能衰竭，严重者可因肺出血或尿毒症而死亡。

5.甲状腺功能亢进症　甲状腺功能亢进症（Graves病）是一种特殊的Ⅱ型超敏反应，即抗体刺激型超敏反应。该病病人体内可产生抗甲状腺刺激素受体的自身抗体。这种抗体与甲状腺细胞表面的受体结合，可刺激甲状腺细胞合成分泌甲状腺素，引起甲状腺功能亢进，而不是使甲状腺细胞破坏。因此将此类超敏反应可视为特殊的Ⅱ型超敏反应。

（二）免疫学检验

Ⅱ型超敏反应性疾病的检测，主要是进行血型、血细胞的数量、抗血细胞抗体、抗基底膜抗体以及抗甲状腺刺激素受体抗体的检测。具体方法和临床分析参见任务十二。

三、Ⅲ型超敏反应常见疾病及检测

（一）Ⅲ型超敏反应的临床常见疾病

1.局部免疫复合物病

（1）Artus反应：Arturs氏曾在家兔皮下多次注射无毒性的马血清，约4次后，局部出现细胞浸润；若再次注射，可发生水肿、出血、坏死等剧烈炎症反应。这是抗原在入侵局部与相应抗体结合形成免疫复合物所致。

（2）人类局部免疫复合物病：可见于胰岛素依赖型糖尿病患者。由于反复注射胰岛素后体内产生过多的抗胰岛素抗体，此时再注射胰岛素时，可在注射局部出现类似Artus反应，数日后逐渐恢复。反复吸入真菌孢子或动植物蛋白粉尘所致的超敏性肺泡炎也属此类反应。

2.全身免疫复合物病

（1）血清病：某些机体在初次注射大剂量异种抗毒素血清7～14天后，局部出现红肿、全身皮疹、发热、关节肿痛、淋巴结肿大及一过性蛋白尿等症状。一般病程较短，停止注射后自行康复。其原因可能是一次输入较多量抗原（异种血清），刺激机体产生抗体。抗体与逐渐被吸收而尚未排除的抗原结合，形成中等分子IC，随血流运行至全身各处，引起一系列临床症状。现在应用精制抗毒素，此病极为罕见。

（2）链球菌感染后肾小球肾炎：占急性肾小球肾炎的80%，常发生于A族链球菌感染2～3周后。因链球菌抗原与相应抗体结合形成的IC沉积在肾小球基底膜，引起急性肾小球肾炎。

（3）系统性红斑狼疮：一种自身免疫性疾病，好发于年轻女性。患者体内可产生多种自身抗体，与自身成分结合成免疫复合物，沉积于全身多处毛细血管基底膜，引起全身性损害。

（4）类风湿性关节炎：可能是病毒或支原体的持续感染使机体IgG分子发生变性，刺激机体产生抗变性IgG的自身抗体，即类风湿因子。它与自身变性IgG结合形成的IC反复沉积于小关节滑膜即可引起类风湿性关节炎。

（二）免疫学检验

Ⅲ型超敏反应的发生主要是由循环免疫复合物（circulating immune complex，CIC）引起，通过检测血中CIC或沉积于组织中的局部IC可以证实某些疾病是否与Ⅲ型超敏反应有关，也可帮助分析判断疾病的进程及转归。

1.抗原特异性IC的检测　抗原特异性IC的检测是检测已知抗原与相应抗体形成的IC。优点是特异性高，通过检测可以了解引起IC病的抗原。但在大多数情况下，形成IC中的抗原种类多，性质不太清楚或非常复杂，所以抗原特异性方法并不常用。

2.抗原非特异性IC的检测　抗原非特异性IC的检测是检测未知抗原与相应抗体形成的IC。临床上常用，其检测方法很多，局部IC多用免疫组化技术，CIC常用聚乙二醇（PEG）沉淀法、超速离心、凝胶过滤、补体－ELISA技术、细胞技术等。

3.临床意义　判定IC为发病机制的证据如下：①病变局部有IC沉积；②CIC水平显著升高；③明确IC中的抗原性质。其中，第三条证据有时很难查到，但至少要具备前两条，单独CIC的测定不足为凭。人体在健康状态下也存在少量的CIC（10～20μg/mL），其生理与病理的界限不易区分。另外，CIC检测的方法太多，其原理各不相同，用一种方法测定为阳性，另一种方法检测可能为阴性；但与免疫组化法一起检测，更具有临床意义。

目前已经明确系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、部分肾小球肾炎和血管炎等疾病为IC病，CIC检测对这些疾病仍是一种辅助诊断指标，对判断疾病活动和治疗效果也有一定意义。在发现紫癜、关节痛、蛋白尿、血管炎和浆膜炎等情况时，可考虑IC病的可能性，进行CIC和局部IC的检测。另外，患有恶性肿瘤时CIC检出率也增高，但不出现Ⅲ型超敏反应的损伤症状，称之为临床隐匿的IC病，然而这种状态常与肿瘤的病情和预后相关。

四、Ⅳ型超敏反应常见疾病及检测

（一）Ⅳ型超敏反应的临床常见疾病

1.传染性超敏反应　胞内寄生菌、病毒和某些真菌感染可使机体发生Ⅳ型超敏反应。由于该超敏反应是在感染过程中发生的，故称传染性Ⅳ型超敏反应。结核病人肺空洞形成、干酪样坏死以及结核菌素皮试引起的局部组织损伤均与Ⅳ型超敏反应有关。基于超敏反应与细胞免疫的关系，临床上借助结核菌素试验以判断机体是否对结核分枝杆菌有免疫保护力。同时，也可根据该试验辅助判断机体的细胞免疫状态及疾病预后的发展情况。

2.接触性皮炎　接触油漆、染料、塑料、农药、化妆品或磺胺类药物等，可使机体致敏。当再次接触相同变应原24h以后，接触部位出现红斑、丘疹、水疱等皮炎症状，48～96h达高峰，严重者可出现剥脱性皮炎。

3.移植排斥反应　进行同种异体器官或组织移植后，如果供受者双方组织相容性抗原（HLA）不完全相同，会发生排斥反应，最终导致移植物坏死脱落，称为移植排斥反应。为减轻或延缓移植排斥反应，通常在移植术后需大剂量、长期使用免疫抑制剂。

（二）免疫学检验

Ⅳ型超敏反应性疾病的免疫学检验，主要是利用皮试检测超敏原，常用的方法如下。

1.皮内试验　已在Ⅰ型超敏反应性疾病检验中介绍，主要用于检测Ⅳ型超敏反应的皮内试验常做结核菌素试验。

2.斑贴试验　是将试验抗原直接贴敷于皮肤表面的方法，主要用于寻找接触性皮炎过敏原。试验抗原为软膏时可直接涂抹在皮肤上，若为固体物时可用蒸馏水混匀浸湿后涂敷于皮肤上，若为水溶液则浸湿纱布后敷贴于皮肤上。所用抗原浓度以不刺激皮肤为原则，涂敷范围以0.5～1cm为宜。涂敷后盖以油纸或玻璃纸，用纱布或绷带固定；如有明显不适感可随时打开查看，并进行适当处理。斑贴试验主要是检测Ⅳ型超敏反应，其敏感程度虽然不太高，但假阳性较少，结果的可信度较大。

Ⅳ型超敏反应的皮内试验，在接触抗原后48～72h内观察结果，皮内试验的阳性结果以红肿和硬结为主，斑贴试验阳性结果以红肿和水疱为主，其结果判断标准见表11－2。

表11－2　Ⅳ型超敏反应皮肤试验结果判断标准