细菌的形态和结构观察

实验一　细菌的形态和结构观察

实验目的

1．初步掌握显微镜油镜的使用和保养方法。

2．熟悉细菌的基本形态和特殊结构。

3．初步掌握细菌涂片和革兰染色法的操作及结果判断。

实验内容和方法

一、显微镜油镜的使用和保养方法（操作）

1．油镜的原理　香柏油与标本玻片的折光率相近似，因此，从聚光器出来的光线通过标本玻片和油镜后，很少折射而直接进入物镜，获得清晰的物像（实验图1－1）。

实验图1-1　油镜原理示意图

2．油镜的使用与保护

（1）使用油镜时，必须端坐，不要倾斜载物台，以免菌液或镜油流出而污染载物台。

（2）以自然光线为光源时，用反光镜的平面；以灯光为光源时，用反光镜的凹面。

（3）将玻片标本放在载物台上，用移动器或固定夹固定。先用低倍镜对好光线，然后转换油镜头，升高聚光器，放大光圈。

（4）使用油镜检查时，先在标本上滴加1滴香柏油，眼睛从侧面观察油镜，慢慢扭动粗调节器，将油镜头缓慢降至油内，不要接触玻片，以免损伤镜头。然后从目镜上观察，扭动粗调节器使镜筒慢慢上移，看到模糊物像时，再转动细调节器，直至物像清晰为止。

（5）观察标本时，宜两眼同时睁开，以减少眼睛疲劳。最好用左眼看目镜，右眼配合左眼绘图或记录。

（6）观察完毕，提升镜筒，用擦镜纸滴少许二甲苯将镜头上的油擦净。然后将物镜转成“品”字形，下降镜筒和聚光器，罩好镜套，放入镜箱中。

（7）显微镜要轻拿轻放，双手托持。平时要放置通风干燥处，防止镜头发霉。

二、细菌的基本形态和特殊结构观察（示教）

1．细菌基本形态的观察　观察细菌时要注意其形态、大小、排列和染色性。

（1）球菌：金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、脑膜炎奈瑟菌。

（2）杆菌：大肠埃希菌、炭疽芽胞杆菌。

（3）弧菌：霍乱弧菌。

2．细菌特殊结构的观察　观察细菌的特殊结构时要注意细菌菌体与特殊结构的形态、染色、大小和位置等特点。

（1）荚膜：肺炎链球菌的荚膜。

（2）芽胞：破伤风梭菌的芽胞。

（3）鞭毛：伤寒沙门菌的鞭毛。

三、细菌的涂片标本制作和革兰染色法（操作）

1．细菌的涂片标本制作

（1）涂片：取洁净载玻片1张，用接种环灭菌后分别取1环生理盐水滴于载玻片两端。再用灭菌接种环分别挑取葡萄球菌和大肠埃希菌菌落少许，均匀涂于玻片两端的生理盐水中，研成直径约1cm的浑浊菌膜。

（2）干燥：将玻片置室温中自然干燥。如要加速干燥，也可把玻片置于火焰高处略加烘烤，但切勿把菌膜烤干。

（3）固定：用玻片夹夹住涂片一端，在酒精灯火焰高热处连续通过3次，将细菌杀死并固定于玻片上，以免细菌在染色中被水冲洗掉及造成污染或感染。

2．革兰染色法

（1）初染：在已固定的涂片上滴加结晶紫染液数滴，染1分钟，水洗。

（2）媒染：滴加卢戈碘液数滴，染1分钟，水洗。

（3）脱色：滴加95%乙醇数滴，轻轻摇动玻片30秒至1分钟至无紫色液脱出为止，水洗。

（4）复染：滴加稀释复红液数滴，复染30秒，水洗，用滤纸吸干，油镜观察。染色结果，紫色为革兰阳性菌（金黄色葡萄球菌）；红色为革兰阴性菌（大肠埃希菌）。

实验报告

1．绘出镜下所见细菌的基本形态和特殊结构图。

2．大肠埃希菌和葡萄球菌的革兰染色性如何？为什么？