变形能力及受体关系的研究

肺气虚证及其分期与红细胞的SOD活性、变形能力及C3b受体关系的研究

肺气虚是肺的生理功能失常的表现,其证见卫外不固,宣降失司和治节不利。此三者是肺气虚逐渐加重的表现。我们称之为肺气虚Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期。我们检测了45例肺气虚证患者红细胞的SOD活性、变形能力及C3b受体。并观察与肺气虚分期的关系。现将结果报告如下。

一、资料与方法

(一)临床资料

本组45例患者均符合1986年郑州会议通过的中医虚证辨证参考标准之肺气虚证的诊断标准。其中男33例,女12例,年龄25~69岁,平均53岁,按照肺气虚的程度和兼证将肺气虚证分为3期。

1.肺气虚Ⅰ期 23例。为轻度肺气虚,肺气虚损程度较轻,病程短,主要损及肺气的卫外功能,临床表现为易感冒、咳嗽痰稀、少气懒言、面色苍白、恶风自汗等。相当于体虚易感冒和慢性气管炎者。

2.肺气虚Ⅱ期 14例。为中度肺气虚,肺气虚损程度较I期为重,影响肺的宣降功能,甚至累及于肾。肺肾气虚,肾不纳气,临床兼见久咳,气短,甚则喘息,动则尤甚,相当于肺气肿阶段。

3.肺气虚Ⅲ期 8例。为重度肺气虚,肺气虚损程度更为严重,影响肺的治节功能。临床上在肺气虚Ⅱ期的基础上,又兼见胸闷、紫绀、心悸、下肢水肿等,属肺气重度虚损,累及心肾,血瘀水停,相当于肺心病者。

4.对照组 20名。均为本院实习生、医护人员及健康献血者,男女各10名,年龄20~60岁,平均5l岁。

(二)实验方法

1.红细胞内SOD活性测定 采用邻苯三酚自氧法,试剂盒由海军抗衰老研究中心提供(批号:910520),取抗凝血2ml于硅化管中,用生理盐水洗涤3次,取红细胞50μl,分别加入双氧水、乙醇和氯仿,进行抽提,离心得SOD抽提液,吸取0.1ml的SOD抽提液加入pH8.20,100mmol/L的tris甲胂酸钠缓冲液中,温浴20min,加入7mmol/L的邻苯三酚0.4ml,4min后加入10mol/LHCl1滴,然后在721分光光度计下比色(λ=420nm),测定SOD值。

2.红细胞变形能力测定 采用微孔滤膜法。仪器为XG1型核孔滤膜红细胞变形仪,滤膜由中国中医研究院西苑医院提供,取0.5ml经洗涤后的压积红细胞加入4.5ml的红细胞悬浮液中,然后在负压为10cmH2O压力下,分别测生理盐水、红细胞悬液的滤过时间和血细胞比容,按Kautsouris和Hass1983年提出的红细胞滤过指数(IF)作为反映红细胞变形能力的指标:

滤过指数=红细胞悬浮液滤过时间-生理盐水滤过时间/生理盐水滤过时间×红细胞悬浮液压积

3.红细胞C3b受体花环率测定 取酵母多糖(Sigma产品)加入小白鼠血清致敏,配成1×10⁸/ml浓度的C3b致敏酵母菌悬液备用,取抗凝血2ml用生理盐水洗涤3次,取压积红细胞并配成1.25×10⁷/ml的红细胞应用悬液,各加5滴红细胞悬液与C3b致敏酵母菌悬液于试管中,充分混匀置37℃水浴30min,加生理盐水1滴,再加2滴0.25%丙二醛混匀,固定涂片,自然干燥。用瑞氏染色,在高倍镜下,计数200个红细胞中结合有2个以上酵母菌的细胞个数,换算成百分率,作为红细胞C3b受体活性的指标。

二、结果

各组红细胞SOD、变形能力和C3b受体与对照组的比较见附表。

附表 肺气虚患者红细胞SOD、IF和C3b受体的测定(x±S)

续表

注:与对照组比较△P<0.01;与I期比较·P<0.01,··P<0.05;与Ⅱ期比较▲P< 0.01.▲▲P<0.05。

结果表明,肺气虚组红细胞内SOD和红细胞C3b受体花环率较健康人低下,而IF较健康人高,且均有显著差异(P<0.01),表明了肺气虚患者存在抗氧化能力和红细胞免疫能力的低下,同时也存在红细胞变形能力的下降。肺气虚各期在抗氧化能力、红细胞变形能力上存在差异(P<0.05或0.01),且依Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期顺序有逐渐加重的趋势,C3b孔受体花环形成率未见此现象(各期相互比较,无统计学意义,P>0.05)。

三、讨论

(一)肺气虚的临床分期

肺气虚是肺生理功能活动失常的表现,肺的主要功能有主皮毛而卫外,主气而司呼吸,内朝百脉而主治节。因此将肺气虚证分为3期:①肺气虚I期,主要指肺的卫外功能减弱,为轻度肺气虚。②肺气虚Ⅱ期为中度肺气虚,是肺气虚I期加重的表现,表现为肺主气而司呼吸功能的减退,甚至累及肾,使肾不纳气。③肺气虚Ⅲ期为重度肺气虚,是Ⅱ期的进一步发展,影响心肾两脏,进而因虚致实,表现为治节功能减退,上不能助心以行血,而致心悸、发绀、静脉曲张;下不能通调水道以输膀胱,而见尿少、水肿等。以上3期之间既有病机、病症之本质不同,又有发生、发展、演变之相互联系。

(二)肺气虚与自由基代谢

本研究证实,肺气虚证患者红细胞内SOD活性显著低于健康人(P<0.01),并且随着肺气虚证分期的加重,而逐渐显著下降(P<0.01)。临床资料表明,肺气虚证多见于老年人,而老年人代谢率低下,减少了体内各种抗氧化成分,且因这些患者多有长期的吸烟和反复肺部感染史,烟气中含有大量自由基以及感染时中性粒细胞释放的大量自由基,消耗了体内大量的自由基清除物,所以肺气虚证患者SOD活性低下,并随病情严重而显著降低。

(三)肺气虚证与红细胞变形能力

本研究证实肺气虚时,红细胞变形能力下降,红细胞滤过指数显著增长,并随着肺气虚证分期的进展而逐渐加重,其机制可能与肺气虚时体内存在不同程度的缺氧有关。有报告称,当血细胞比容>60%。PaO₂<40mmHg,动脉血pH为7.0时,RBC的变形能力减弱或丧失;同时,肺气虚时体内自由基产生增多,而清除酶SOD活性降低,使得细胞膜脂质过氧化,细胞膜磷脂降低,也能致红细胞变形能力下降。

(四)肺气虚与红细胞C3b受体

1963年Nelson首先报道了红细胞膜上存在C3b受体,具有免疫黏附作用。Fearon等认为红细胞上的C3b受体约占全血C3b受体总数的95%,因此人体清除循环免疫复合物(CIC)的作用主要依赖于红细胞。本研究表明,肺气虚患者红细胞上的C3b受体显著低于健康人(P<0.01),提示红细胞不仅参与载气的作用,也参与卫外的功能,这是因为红细胞的C3b受体能黏附自身的T细胞,使抗原与T细胞紧密靠拢,并将抗原提呈递交给T细胞,提高了T细胞的免疫功能,且参与干扰素、免疫球蛋白、白细胞介素、NK细胞的免疫调控作用。而如果红细胞的C3b受体下降,则不足以清除沉积于肺脏的CIC,因此造成了肺脏的损伤。肺气虚患者红细胞的C3b受体的下降,可能与SOD下降有关,吞噬细胞的正常吞噬赖于红细胞膜上的SOD,而SOD活力下降,则造成C3b与CIC结合的能力下降。

总之,肺气虚时红细胞清除自由基的功能、变形能力以及免疫吸附作用等多种功能减退,其中SOD活性下降是导致红细胞变形能力及免疫功能下降的原因之一,表明了气病可累及于血,而红细胞不仅有载气作用,且又参与卫外机制,并在维持肺气正常功能中起着重要作用。