一、目的要求
通过对有丝分裂孢子真菌中各类型代表菌的观察，了解有丝分裂孢子真菌的分类依据，掌握有丝分裂孢子真菌主要属的形态特征及其所致主要植物病害的症状特点，进一步学习和训练制作徒手切片的技能。
二、材料和用具
（一）实验材料
相关植物病害的标本，病原菌的培养物或永久玻片。
（二）实验用具
显微镜、擦镜纸、装有浮载剂的滴瓶、挑针、刀片、通草、剪刀、载玻片、盖玻片、小纱布等。
三、内容和方法
（一）丝孢纲（Hyphomycetes）
1.梨孢属（Pyricularia）
取稻瘟病菌（P.oryzae）为害的水稻发病小枝梗或茎节保湿，挑取病部灰白色霉层制片镜检，观察分生孢子梗和分生孢子的形态。 认真观察稻瘟病标本的症状，扼要描述稻瘟病的几种症状特征和类型。
2.粉孢属（Oidium）
引起植物白粉病。观察小麦白粉病（O.graminis）标本的症状。挑取少许粉状物制片镜检观察，注意观察分生孢子梗和分生孢子的形态及分生孢子的排列方式。
3.青霉属（Penicillium）
柑橘青霉病菌（P.italicum）是柑橘贮藏和运输过程中的重要病原菌。观察由青霉菌引起的柑橘、苹果、梨等果腐症状特点。 挑取发生果腐病水果表面的白色菌丝附近的青色霉层制片镜检，观察青霉菌分生孢子梗及孢子，注意观察分生孢子梗的分枝和顶端产孢细胞的形态特征。
4.尾孢属（Cercospora）
仔细观察花生黑斑病（Ca.rachidicola）为害花生的症状特点。取花生黑斑病叶片做徒手切片，或取花生黑斑病菌永久玻片镜检，观察子座、分生孢子梗和分生孢子的形态特征。 注意观察分生孢子梗着生的方式及其顶端的形态、分生孢子梗和分生孢子的颜色及分生孢子的形状及分隔情况。
5.镰孢属（Fusarium）
观察由棉花枯萎病菌（F.oxysporumf.sp.vasinfectum）、小麦赤霉病菌（F.graminearum）和水稻恶苗病菌（F.moniliforme）引起的植物病害症状特点。 观察上述三种病原菌培养物的形态，注意培养物（基）的颜色变化。挑取培养物制片镜检，观察大型分生孢子（镰刀形，多细胞，基部有时有一显著的突起，称足胞）和小型分生孢子（单胞、无色、椭圆形），观察有无分生孢子座。 有的镰孢菌还产生一种厚垣孢子，这是病原菌在不良条件下形成的休眠孢子，抵抗不良环境的能力强。 观察菌丝上或大型分生孢子上有无厚垣孢子。
6.轮枝孢属（Verticillium）
大丽轮枝菌（V.dahliae）是引起棉花黄萎病的病原菌。 观察人工培养的大丽轮枝菌菌落和微菌核形态特征，用刀片将菌丝块切成一薄片，侧放在载玻片上，置于低倍镜下镜检，调节微调可见到无色分生孢子梗，主轴分成几节，节处有两个或多个分枝，每个分枝和主轴的顶端着生多个分生孢子，形成分生孢子球。 分生孢子单胞，无色，长椭圆形。 观察棉花黄萎病标本症状，注意维管束变色，并与棉花枯萎病维管束变色对比观察。
7.链格孢属（Alternaria）
茄链格孢（A.solani）引起马铃薯和番茄早疫病，观察早疫病病叶上的褐色同心轮纹病斑，病斑上有黑色霉状物。 选择有褐色同心轮纹病斑处，制作徒手切片镜检。 观察分生孢子梗和分生孢子的形态、颜色。 注意分生孢子顶端的喙状细胞。
8.离蠕孢属（Bipolaris）
玉蜀黍离蠕孢（B.maydis）引起玉米小斑病。观察玉米小斑病标本的症状。 取玉米小斑病菌制成临时玻片，或用玉米小斑病菌的永久玻片镜检，注意观察分生孢子梗的着生情况、颜色、有无分枝和曲膝状形态，分生孢子的颜色、多胞、纺锤形、常向一方弯曲的形态特点，注意脐点稍微突出、平截状，分生孢子萌发时，两端细胞萌发。此外，稻离蠕孢菌（B.oryzae）引起水稻胡麻斑病，其标本也可作为镜检材料。
9.突脐蠕孢属（Exserohilum）
大斑突脐蠕孢菌（E.turcicum）引起玉米大斑病。 观察玉米大斑病标本的症状特点，并在病斑大小和形状上与玉米小斑病进行比较。 取玉米大斑病菌制成临时玻片，或用玉米大斑病菌的永久玻片镜检，观察分生孢子梗和分生孢子的颜色、分隔与形态特征，注意分生孢子的脐点明显突出于基细胞外，分生孢子萌发时两端细胞萌发。
10.内脐蠕孢属（德氏霉属Drechslera）
该菌寄主范围窄，侵染禾本科植物和其他植物叶，引起叶斑病。 观察小麦叶枯病（D.tritici）标本，注意症状特点。 镜检小麦黄斑德氏霉（D. teres）或大麦条纹德氏霉（D.graminea）永久玻片，观察分生孢子梗的单生与簇生。 注意分生孢子梗褐色具隔，上部呈曲膝状，孢痕明显，分生孢子圆柱形，两端钝圆，淡褐色，多细胞，脐点腔孔状，凹陷于基细胞内，萌发时每个细胞均可伸出芽管。有性态为核腔菌属（Pyrenophora）。注意其与平脐蠕孢属和突脐蠕孢属的区别。
11.丝核菌属（Rhizoctonia）
本属真菌不产生任何无性孢子。 立枯丝核菌（R.solani）侵染多种植物的幼苗或幼茎基部引起立枯病，侵染水稻、玉米和小麦等引起纹枯病。 观察水稻纹枯病标本、棉花立枯病标本的症状特点。 观察立枯丝核菌人工培养物形态，注意幼龄菌丝无色，后期呈褐色。 挑取培养的水稻纹枯病菌菌丝体，制片观察菌丝的颜色、分枝处的缢缩、分枝附近的隔膜和分枝间形成的角度。注意幼龄菌丝和老熟菌丝分枝间的角度常有不同。
（二）腔孢纲（Coelomycetes）
1.刺盘孢属（Colletotrichum）
观察棉花炭疽病（C.gossypii）、辣椒炭疽病（C.piperatum）、豆类炭疽病（C.truncatum）的标本症状特征，比较症状类型、病斑特点及病征。选取任一炭疽病材料做徒手切片，镜检。 注意有无刚毛，刚毛的颜色如何，刚毛有无分隔，如何将刚毛与植物的表皮毛区分开，分生孢子盘的形状，分生孢子梗的形状和分布，分生孢子的颜色和形状，分生孢子有无分隔。
2.拟盘多毛孢属（Pestalotiopsis）
以枇杷灰斑病（P.funerea）标本为材料，选取粗大的小黑点，制作徒手切片，镜检。 观察分生孢子的分隔数、分生孢子各细胞的颜色变化、分生孢子顶端附属丝根数和形状。 注意分生孢子分隔的多少是区分拟盘多毛孢属和盘多毛孢属（Pestalotia）的重要标志，盘多毛孢属分生孢子5个隔膜，6个细胞；拟盘多毛孢属分生孢子4个隔膜，5个细胞。
3.茎点霉属（Phoma）
取葡萄黑腐病（P.viticola）标本材料，制作徒手切片镜检，观察分生孢子器的形状，内壁是否有分生孢子梗。 分生孢子单胞，无色。 观察葡萄黑腐病和水稻谷枯病（P.glumarum）标本的症状特点。
4.叶点霉属（Phyllosticta）
该属和茎点霉属在形态上相似，比较难以区分。 传统上把寄生在植物茎上的，产生分生孢子器，具有小型、无色、单细胞分生孢子的真菌鉴定为茎点霉属，把寄生在植物叶片的该类真菌鉴定为叶点霉属。 取栀子花叶斑病叶片，观察病害症状特征，并制作徒手切片，镜检，观察病菌的分生孢子器、分生孢子的形态特征。
5.大茎点菌属（Macrophoma）
观察大叶黄杨病叶材料，制作徒手切片，镜检。 观察分生孢子器、分生孢子梗和分生孢子的形态特征，并与茎点霉属和叶点霉属相比较，注意比较它们分生孢子的大小。大茎点菌属分生孢子大小一般超过15μm。
苹果轮纹病菌（M.kawatsukai）主要为害苹果、梨的枝干及果实，取其切片镜检病原菌的分生孢子器、分生孢子梗、分生孢子。 观察标本的症状特点。
6.拟茎点霉属（Phomopsis）
取茄褐纹病菌（P.vexans）永久玻片或取茄褐纹病标本材料制作徒手切片，镜检观察分生孢子器内产生的两种分生孢子分别是什么形状，注意只有观察到线形分生孢子才能确定为拟茎点霉属。 观察茄褐纹病菌、芦笋茎枯病菌（P.asparagi）标本的症状特点。
7.壳针孢属（Septoria）
观察小麦叶枯病菌（S.fritici）永久玻片或取一年蓬叶斑病病叶作材料制作徒手切片，镜检。 观察分生孢子器的形状和分生孢子的形状，注意分生孢子有无分隔。
8.色二孢属（Diplodia）
取棉铃黑果病菌（D.gossypina）的永久玻片镜检，观察分生孢子器和分生孢子的形态。 注意分生孢子的颜色和分隔，单胞、无色的为初期未成熟孢子；双胞、褐色的为成熟孢子。 观察棉铃黑果病病害的症状。
9.壳二孢属（Ascochyta）
取蚕豆褐斑病菌（A.fabae）永久玻片镜检，观察分生孢子器和分生孢子的形态，注意分生孢子的颜色和隔膜数。 分生孢子初期单胞，后期双胞。 观察蚕豆褐斑病的症状特点。
四、实验学时
3~6学时。
五、作业与思考题
1.绘制梨孢属和尾孢属的分生孢子梗和分生孢子形态图。
2.绘制刺盘孢属和拟盘多毛孢属的分生孢子盘和分生孢子形态图。
3.绘制拟茎点霉属和壳二孢属分生孢子器和分生孢子形态图。
4.你能在显微镜下分辨出分生孢子器和子囊壳吗？如何区别？
5.为什么说有丝分裂孢子真菌和子囊菌关系极为密切？试从营养体、繁殖体形态以及为害植物的症状特点等方面加以分析。
附7-1 丛梗孢目真菌分科分属检索表
附7-2 黑盘孢目黑盘孢科真菌主要属检索表
附7-3 球壳孢目壳孢科真菌主要属检索表
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