一、目的要求
认识植物病原细菌的形态和菌龄特征，学习并掌握细菌鞭毛染色的原理及方法，比较鞭毛染色制片过程与革兰氏染色涂片法的差异，熟悉菌体鞭毛数目及着生位置与细菌分类鉴定的关系。
二、材料和用具
（一）实验材料
1.供试菌种
白菜细菌软腐病菌或甘蓝黑腐病菌。 供试菌种必须在使用前5d移植，临用前18~24h再转试管1次，以保证菌体处于分裂活跃时期。
2.染液
（1）媒染液A
10%的单宁酸10m L，加5m L饱和硫酸铝钾水溶液，再加1m L苯胺饱和水溶液形成沉淀，通过摇动又能重新溶解，加入5%的Fe Cl3水溶液1m L形成黑色溶液，稳定10min后使用。
（2）银染液B
配制5%的Ag NO3水溶液100m L，取10m L备用，在缓慢加入氨水形成的沉淀刚好重新溶解时，把备用的10m LAg NO3水溶液向其中逐滴加入，直到摇动后呈现轻微而稳定的薄雾状溶液为止，避光保存。
（二）实验用具
接种环、无菌水、显微镜、吸水纸、清洁试管、镊子、清洁无脂载玻片、脱脂棉、草纸、装有酒精的试管、酒精灯等。
三、内容和方法
（一）实验原理
细菌的鞭毛极细，直径一般为10~20nm，只有用电子显微镜才能观察到。 但是如果采用特殊的染色法对其进行染色，则在普通光学显微镜下也能看得到。 鞭毛的染色方法很多，但其基本原理都相同，即在染色前先用媒染剂处理，让它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。 常用的媒染剂由单宁酸和氯化铁或钾明矾等配制而成。
（二）镀银法染色
1.载玻片的准备
选择光滑无裂痕的载玻片（最好选用新的）。
2.菌悬液的制备
供试菌株接种培养18~24h，用接种环挑取斜面与冷凝水交接处的菌液数环，移至盛有1~2m L无菌水的试管中，使菌液呈轻度混浊。 将该试管放在37℃恒温箱中静置10min，让幼龄菌的鞭毛舒展开。
3.涂片
吸取少量菌液滴在清洁载玻片的一端，立即将载玻片倾斜，使菌液缓慢地流向另一端，用吸水纸吸去多余的菌液。 涂片放在空气中自然干燥。
4.染色
（1）滴加A液，染色4~6min；
（2）用蒸馏水充分洗净A液；
（3）用B液冲去残水，再加B液于载玻片上，在酒精灯火焰上加热至有蒸汽产生，维持0.5~1min（加热时应随时补充蒸发掉的染料，不可使载玻片出现干涸区）；
（4）用蒸馏水洗净，自然干燥。
5.镜检
先用低倍镜，再用高倍镜，最后用油镜观察。
结果：菌体呈深褐色，鞭毛呈浅褐色。
（三）注意事项
1.染液要现配现用，不能长时间保存。
2.细菌鞭毛极细，很易脱落，在整个操作过程中，必须仔细小心，以防鞭毛脱落。
3.染色用载玻片干净无油污是鞭毛染色成功的先决条件。
4.油镜使用之后要及时用无水乙醇清洗镜头。
四、实验学时
3学时。
五、作业与思考题
1.每人交检测玻片1~2片，并完成实验报告1份。
2.细菌鞭毛染色具有什么意义？
3.鞭毛染色中细菌的培养时间为什么不能超过24h？
4.细菌鞭毛染色过程中应当注意什么问题？
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