一、目的要求
认识植物病毒病害的症状特性和主要症状类型，掌握病毒内含体的本质及撕片法制片观察技术，了解病毒内含体的一般形态，为植物病毒病的诊断奠定基础。
二、材料和用具
（一）实验材料
1.病害标本
（1）烟草花叶病毒病（Tobacco mosaic virus）标本
（2）蚕豆花叶病毒病（Broad bean mosaic virus）标本及新鲜病叶
（3）萝卜花叶病毒病（Radish mosaic virus）标本
（4）番茄条纹病毒病（Tomato stripe virus）标本
（5）马铃薯卷叶病毒病（Potato leaf roll virus）标本
（6）番茄蕨叶病毒病（Tomato fern leaf virus）标本
（7）榨菜缩叶病毒病（Mustard leaf curl virus）标本
2.药品
鲁戈尔碘液、锥兰染液等。
（二）实验用具
显微镜、载玻片、盖玻片、尖头镊子、刀片、浮载剂等。
三、内容和方法
（一）实验原理
1.病毒病害的症状
植物病毒病害的症状识别是病毒病诊断的重要方法，植物病毒病害的症状主要有变色、坏死、畸形。
（1）变色
植物器官部分褪绿而形成斑驳的称为花叶，全面褪色的称为黄化。 典型的花叶症状最先表现为叶脉透明（明脉），以后表现为叶色的深浅不一，浓绿与淡绿相嵌，叶面皱缩不平。
（2）坏死
受病的寄主组织局部枯死。 枯死发生于叶片的称为枯斑，发生在茎秆和果实上的称为条纹或条斑。
（3）畸形
受病植株全株或部分器官与正常植株在形态上出现差异。
2.病毒内含体
植物病毒病在寄主外表无病征，但是有些病毒病在受侵染细胞中常见到一定形状的内含体。 其中一些可在光学显微镜下检查到，还有一些必须通过电镜才能看到。 存在于细胞核内的称为核内含体，存在于细胞质的称为细胞质内含体。 不同属的植物病毒往往产生不同类型不同形状的内含体，通常有不定形、结晶状、风轮状等。 不定形内含体是由病毒粒体和寄主细胞成分混合组成的，而晶体状内含体一般是由病毒粒体整齐排列堆叠而成。 内含体的差异可作为某些病毒种属的一个参考鉴别特征，如只有马铃薯Y病毒属（Po-tyvirus）才形成风轮状内含体。
（二）病毒病害的症状观察
1.变色
观察烟草花叶病毒病、蚕豆花叶病毒病标本，注意叶片颜色的变化，叶片厚薄是否均匀、有无皱缩、植株的哪些叶片表现出的症状最明显。
观察马铃薯卷叶病毒病的症状，注意病株变黄、叶片上卷等现象。
2.坏死
观察番茄条纹病毒病，注意受病部位和枯死症状。
3.畸形
观察番茄蕨叶病毒病和榨菜缩叶病毒病标本，注意哪些部位组织的形态与健全的植株不同。
（三）病毒内含体观察
1.撕片法直接检查
取显症的蚕豆花叶病叶片，用尖头镊子从褪绿部位撕取一层下表皮，置于载玻片上的小水滴中，盖上盖玻片，在显微镜下直接观察，在蚕豆的表皮细胞内可见不定形的内含体。
2.鲁戈尔碘液染色
用碘1g，碘化钾2g，蒸馏水300m L配成碘液。滴1滴碘液于载玻片上。用镊子撕取蚕豆花叶病病叶下表皮置于碘液中染色2~3min，加盖盖玻片，置于显微镜下观察。 可见表皮细胞内细胞核被染成鲜黄色，蚕豆花叶病毒不定形内含体被染成黄褐色。
（四）注意事项
1.内含体多存在于明显症状的叶片中，尤以叶片表皮细胞和表皮内为多，因此撕取叶片时一定要撕取有明显症状的。
2.观察内含体时注意与细胞核区别。 一般细胞核边缘光滑，核膜清楚，呈椭圆形，而内含体边缘不光滑。
四、实验学时
3学时。
五、作业与思考题
1.每人交清晰检测玻片1~2片，并完成实验报告1份。
2.病毒的内含体与寄主植物细胞核之间有什么区别？
3.撕片法直接检察病毒内含体时为什么要取下表皮？
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