一、目的要求
学习和掌握不同类型病害的发生特点，学会田间病害诊断和鉴定的一般方法，明确望、闻、问、切的意义及各种制片方法要领，并能根据相应的病害结合所学知识提出可能的防治措施。
二、材料和用具
（一）实验材料
采集的各类植物病害新鲜标本。
（二）实验用具
显微镜、载玻片、盖玻片、培养皿、解剖针、放大镜、刀片、酒精、盐酸等。
三、内容和方法
在田间采集各类植物病害标本，挑取其中一种或几种植物，以其中某一部位（茎、叶、根等）观察其病害特征，初步诊断病害类型。 然后，对存在病原物的病害，根据下述方法进行病原鉴定，进一步确诊病害类型，要求真菌、细菌、病毒、线虫等病害各鉴定几种。 本实验由于受作物品种、地理条件、环境因素、气候条件等方面的影响，病害的发生会有很大的差异。 故在进行病害调查时应根据具体情况，选择3~5种作物，每种作物选择2~3个品种，根据已学知识对每种作物上具有典型症状的病害进行一般调查和诊断，并填写表3-1。同时，选择几种仅通过症状观察难以确定的病害，在实验室做进一步的病原鉴定。
（一）真菌病害的诊断和鉴定
真菌病害的鉴定主要是根据症状特征和病原真菌的形态特征进行。 不同的真菌和其他病原物可引起相似的症状，因此应以病原真菌的鉴定为依据。
1.症状观察
观察症状时，先注意病害对全株的影响（如萎凋、萎缩、畸形和生长习性的改变等），然后检查病部。 观察斑点病害，要注意斑点的形状、数目、大小、色泽、排列和有无轮纹等；观察腐烂病害，要注意腐烂组织的色、味、结构（如软腐、干腐）以及有无虫伤等。 注意有无病征，即真菌产生的孢子和子实体等，放大镜和解剖镜在检查病征时很有用。 特别值得提出的是，鉴定时常常会遇到许多非侵染性病害，它们的症状有的与病毒病、线虫病或有些真菌病害很相似，甚至在上面还能检查到真菌，当然，这些真菌一般是后来在上面生长的腐生性真菌。 非侵染性病害，一般在田间是普遍发生的，与地形、土壤、品种和气候等条件有关，没有完整的田间记录有时是很难鉴定的，最好是就地观察、调查和分析，不能单纯依靠室内检查。
2.病原菌鉴定
症状对鉴定不是绝对可靠的，不同的病原物可能产生相似的症状，而一种病害的症状可能因寄主和环境条件而变化。 因此，标本的显微镜检查非常重要。 真菌病害标本或培养的真菌，应因材料的不同而采取不同的方法检视。
（1）菌丝体和子实体的挑取检视
标本或培养基上的菌丝体或子实体，一般可直接用挑针挑取少许，放在加有1滴浮载剂的载玻片上，加盖玻片在显微镜下检视。
（2）叶面真菌的粘贴检视
叶面真菌的粘贴检视可用透明胶、醋酸纤维素、火棉胶或其他粘贴剂等。目的是检查叶片表面的真菌，如白粉菌和其他霉菌等。
（3）组织整体透明检视
组织透明后的整体检查，不但可以看清表面的病菌，还可以观察组织内部的病菌。 使组织透明的方法很多，最常用的是水合氯醛。
水合氯醛透明：为了观察病叶表面和内部的病菌，可将小块叶片在等量的酒精和冰醋酸的混合液中固定24h，然后浸泡在饱和的水合氯醛溶液中，待组织透明后取出用水洗净，经稀苯胺蓝的水溶液染色，用甘油浮载检视。
（4）真菌的玻片培养检视
对于琼脂培养基表面的真菌，直接挑取检视往往会破坏其结构，故玻片培养是很好的检视方法。
（5）琼脂培养基中真菌的检视
对于琼脂培养基表面下的真菌结构，可以从平板上切取小块带菌的琼脂培养基，放在载玻片上，加盖玻片挤压后检视。
（6）真菌细胞核和染色体的观察
真菌细胞核和染色体的观察对了解真菌致病性和变异是非常重要的，有时需要对真菌染色体的变化或细胞核进行观察。 细胞核染色方法很多，通常使用苏木精染色或DAPI荧光染料染色。
（7）组织浸离检视
组织浸离就是将根、茎、树皮等组织用药处理，除去中胶层，使细胞分离，以观察单个细胞的形态。
（8）徒手切片检视
徒手切片在教学和研究上都很有用，不需要特殊设备，操作方便，是最常用的真菌检视方法。
3.病原真菌半永久玻片的制作及显微成像
（1）半永久玻片的制作方法
①准备载玻片：挑取干净的载玻片，并用纱布擦干净。
②滴浮载剂：用滴管滴半滴乳酚油于载玻片上。
③挑取病原物：挑取病原物置于浮载剂中。
④盖片、封固：轻轻盖上盖玻片，将盖玻片周围用指甲油封住。
⑤贴标签：贴标签并写上病原物名称、寄主植物、制作时间、制作人等。
（2）显微成像技术
①玻片制作：把将要显微照相的病原物制成临时玻片。
②镜检：在显微镜下观察，找到需要拍照的结构。
③设置参数：打开显微照相系统，在设置选项中设置所需参数：第一，标准标定设置倍数（与当前显微镜物镜所使用的倍数一致）；第二，设置比例尺，包括比例尺放置的位置、方式（水平或垂直），比例尺的大小、颜色。
④拍照：设置好参数后，调节显微镜的细调节螺旋，使病原物结构在电脑屏幕上尽可能地显示清晰，点击拍照按钮或在屏幕上右键单击拍照，将照片保存在某个文件夹中即可。
（二）细菌病害的诊断和鉴定
植物细菌病害的为害症状和发生发展规律并不像病毒病害那样与真菌有很大的差别，所以鉴定和诊断方法与真菌病害相似，由于细菌很小，可以作为分类根据的形态学性状比较少，因此细菌的鉴定方法与真菌又有所不同。
1.症状观察
植物细菌病害表现各种类型的症状，不同属的细菌侵染植物后引起的症状有所不同，如棒形杆菌属细菌主要引起萎蔫，假单胞菌属细菌主要引起叶斑和叶枯（少数枝枯、萎蔫和软腐），黄单胞菌属细菌主要引起叶斑和叶枯，土壤杆菌属细菌主要引起肿瘤，欧文氏菌属细菌主要引起软腐等。 许多细菌性病害的病斑还带有水渍状，有时可以作为诊断的依据。 植物病部有时还有菌脓排出，也可以作为植物细菌病害的诊断依据。
2.病原菌鉴定
（1）显微镜观察
显微镜观察对诊断是非常重要的，细菌侵染引起的病害，受害部位的维管束或薄壁细胞组织中一般都有大量的细菌，用显微镜观察组织有无细菌流出（喷菌现象）。
（2）病原细菌分离鉴定
植物病原细菌一般都用稀释分离法。 病原细菌在组织中的数量很大，稀释培养可以使病原细菌与杂菌分开，形成分散菌落，容易分离得到纯培养，对病原细菌的识别和鉴定有很大帮助。 病原细菌的鉴定通常需要进行生理生化测定和致病性测定。
（三）病毒病害的诊断和鉴定
病毒病害是作物的重要病害，几乎每种作物都发现有一种或几种甚至十几种病毒病害。 对于病毒病害，首先要注意它的病理现象，有助于病毒病害的鉴别。
1.症状观察
植物病毒必须经过一定的伤口才能侵入寄主植物的细胞。 例如，叶片经摩擦接种病毒后，在接种点可形成局部斑点，有坏死褪绿、黄化等不同颜色，大小也可以不同。 植物病毒从侵入点扩散，一般可以扩散到全株，表现各种外部症状。 植物病毒病的外部症状一般可以归为七种类型：花叶、变色、环斑（环纹）、坏死、矮缩、矮化和畸形。 植物病毒病的内部症状包括组织与细胞的变化和内含体的变化两个方面。
2.病毒形态观察
不作要求。
（四）线虫病害的诊断和鉴定
1.症状观察
植物受到线虫为害后，可以表现各种症状，如瘿瘤、叶斑、坏死或整株枯死等，通常可以在病变部位找到病原线虫，但是多数线虫病表现为变色、褪绿、黄化、矮缩和萎蔫等症状，这多半是为害根部造成的。 各属线虫为害不同，茎线虫主要为害植物地下茎，胞囊线虫多寄生在植物根部支根或须根侧面，根结线虫在新生的支根或侧根上寄生后引起根结，粒线虫和滑刃线虫主要为害植物的地上部分，可以传染植物病毒的长针线虫、剑线虫和毛刺线虫等，在根外寄生。
2.病原鉴定
直接观察分离胞囊线虫、根结线虫等根部寄生的线虫，可在解剖镜下用挑针直接挑取虫体观察，对于一些虫体较大的线虫，如茎线虫和粒线虫等，可在解剖镜下用尖细的竹针或毛针将线虫从病组织中挑出，放在凹穴玻片上的水滴中，做进一步的观察和处理。
四、实习时间
3天。
五、作业与思考题
1.填写病害调查表。
表3-1 田间一般病害的诊断和鉴定
2.鉴别真菌、细菌、病毒和线虫病害10~20种，交由老师检查，作为平时成绩。
3.病毒病害分布广泛，其症状也与某些非侵染性病害相似，思考有何简易方法能有效区别病毒病害和非侵染性病害。
免责声明：以上内容源自网络，版权归原作者所有，如有侵犯您的原创版权请告知，我们将尽快删除相关内容。
