培养基及棉塞是植物病理学实验常用的材料，培养基依其性状、成分、用途的不同而有不同的分类，培养基和棉塞的制作与灭菌方法的掌握，是今后开展病理学研究的一项基本功。
一、目的要求
了解培养基的类型及用途，掌握常用培养基和棉塞的制作方法，学习灭菌原理及操作方法。
二、材料和用具
（一）实验材料
马铃薯。
（二）实验用具（药品）
烧杯、玻璃棒、纱布、锥形瓶、棉花、扎线、灭菌锅、试管、葡萄糖、琼脂、1mol/LNa OH溶液、1mol/LHCl溶液、p H试纸等。
三、内容和方法
（一）灭菌的原理及方法
灭菌的方法有热力灭菌、过滤灭菌、化学灭菌和辐射灭菌等，而培养基的灭菌一般都使用加压蒸气灭菌法。 加压蒸气灭菌法是一种迅速而有效的灭菌方法，它使用高压蒸气灭菌器，利用加热产生蒸气，随着蒸气压力不断增加，温度随之升高。通常压力在103.4k Pa时，器内温度可达121.0℃，维持该温度15~30min，可杀灭包括芽孢在内的所有微生物。 该方法具有穿透力强，传导快，能使微生物蛋白质较快变性或凝固的特点，作用可靠，操作简便。
（二）常用培养基PDA的制作方法
1.称量
称200g去皮的马铃薯并切成玉米粒大小的小块，用烧杯量取1000m L水。
2.煮沸
将量好的马铃薯和水加入锅中，加热煮沸15min；煮好后用4层纱布过滤，并定容至1000m L；加入17g琼脂条加热至琼脂完全熔化即可。
3.定容、调节p H
加入20g葡萄糖，用玻璃棒搅拌使葡萄糖完全溶解，最后定容至1000m L，并用1mol/L的Na OH或1mol/L的HCl溶液调节p H至7.0。
4.分装、灭菌
将配制好的PDA分装到锥形瓶或试管中，并包扎好瓶口或试管口，置于灭菌锅中，121℃灭菌30min。注意试管和锥形瓶的分装容量标准。
（三）棉塞的制作方法
取1块适当大小的纱布，将其中心铺于管口任其自然下垂至管壁，将试管上端与纱布一并握住，用1根小木棒或玻璃棒将纱布中心向管内推进，至该棉塞所需长度后握紧试管上端，用小木棒或玻璃棒将适量棉花向管内填塞并压紧，充实后将纱布尾端敛紧，抽出1/3长度，散开纱布向棉塞尾部加适量棉花并压紧使之略大于试管口，再敛紧尾部纱布并用棉线扎紧，剪去多余的线头和纱布即可。
（四）注意事项
1.灭菌锅使用过程中应该注意以下问题：
（1）检查灭菌锅中的存水量，加水到指定的指标。
（2）在加热过程中，当空气完全排除后（当蒸气开始有力地冲出时）关闭气门。
2.在培养基分装的过程中，不要让培养基沾到瓶口上，避免被污染。
3.棉塞制作时，棉花的填塞要连续均匀，避免形成松紧不一的两、三个节段。
四、实习时间
1天。
五、作业与思考题
1.每人上交带棉塞的试管培养基2支、三角瓶1个。
2.按性状和用途可将培养基分为哪些类型？试举例说明。
3.在分装培养基过程中，需要注意什么？
4.简述蒸汽灭菌的操作步骤，并说一说应注意哪些安全环节。
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